de la TRANSCRIPCION y de la EXPRESION GENICA

Presentación del tema: "de la TRANSCRIPCION y de la EXPRESION GENICA"— Transcripción de la presentación:

1 de la TRANSCRIPCION y de la EXPRESION GENICA
REGULACION de la TRANSCRIPCION y de la EXPRESION GENICA Curso de Biología Molecular y Genómica para Profesores de Enseñanza Media 2014 Dr. Héctor Toledo Facultad de Medicina, Universidad de Chile

2 ¿ Cómo se organiza el genóma? La Unidad transcripcional
Operón bacteriano

3 ¿Es el mRNA eucarióntico complementario al DNA cromosomal?
intrones y exones en genes eucariontes

4 En bacterias la transcripción y la traducción están acopladas

5 Transcripción en eucariontes
DNA Ocurre en el núcleo Transcrito primario no es funcional Nucleus RNA Transcription G AAAAAA RNA Processing mRNA Export G AAAAAA

6 Procesamiento del transcrito primario
¿Cómo se realiza la maduración del mRNA? Procesamiento del transcrito primario “Capping” en el extremo 5’ Poliadenilación en el extremo 3’ Splicing o remoción de intrones

7 CAPPING en el extremo5´ - Eficiencia de la Traducción
7-metilguanosina enlace 3´-5´fosfodiester enlace 5´-5´trifosfato CAPPING en el extremo5´ - Eficiencia de la Traducción - Estabilidad del RNA mensajero

8 Poliadenilación en el extremo 3’
Término de la síntesis del RNA mensajero y síntesis de la cola de poliA Poliadenilación en el extremo 3’ - Eficiencia de la Traducción - Estabilidad del RNA mensajero

9 ¿Existen Señales de Splincing que den cuenta de este proceso?
Splicing o remoción de intrones ¿Existen Señales de Splincing que den cuenta de este proceso?

10 ¿Cómo se realiza este proceso?
Señales de Splicing Sitio de splicing 5’ Punto de ramificación Sitio de splicing 3’ GU A …AG Intron ¿Cómo se realiza este proceso?

11 ¿Qué moléculas participan en este evento?
Mecanismo de splicing Ataque Nucleofílico enlace fosfodiester inusual 5’-3’ and 5’-2’ Ataque Nucleofílico ¿Qué moléculas participan en este evento?

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14 PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Varias señales de poliadenilación Varias señales de splicing

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17 Mecanismo de regulación de las síntesis de proteínas en eucariontes mediante RNA interferente

18 ¿Podemos utilizar este mecanismo en beneficio de la salud?
Cell,  150: , 2012

19 Terapia Génica Alcoholismo

20 Genómica funcional

21 La revolución de les ciencias “ómicas”
Genomas Información Genómica Genes Expresión Transcriptómica Proteínas Estructura Actividad Proteómica Metabolitos Composición Cuantificación Metabolómica Organismo Fenotipo Salud y enfermedad

22 ¿Como explorar el genoma? Niveles de análisis de la función génica

23 Proteómica Análisis de la función de los genes.
Transformándose en el campo central de la genómica funcional. Se inicia en 1970s con el diseño de los geles-2D. Alcanza su desarrollo en 1990s con la adaptación de la espectrometría de masa a los problemas biológicos

24 Proteómica de expresión: su objetivo es medir los niveles de proteínas después de someter el modelo experimental a un estímulo e identificar las proteínas que cambian.

25 Electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturante

26 Electroforesis en geles de poliacrilamida: método de análisis de proteínas

27 Isoelectroenfoque

28 Electroforesis bidimensional

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30 Respuesta al pH ácido Huésped Helicobacter pylori
Estrés Lumen Tejido Limitación de Nutrientes Peristaltismo Receptores Quimiotácticos Efectores Huésped Bicarbonato Arginina Otras moléculas Secreción gástrica Respuesta al pH ácido

31 Análisis mediante electroforesis bidimensional.
¿Se modifica el contenido de proteínas de H. pylori l al exponer la bacteria a un pH levemente ácido ? Análisis mediante electroforesis bidimensional. pH 7 pH 6 Las células se incubaron a pH 7 o pH 6 por 1 hora en presencia de metionina S35. ¿Cómo podemos identificar la identidad de cada mancha?

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34 ¿Qué es lo que la espectrometría de masa hace?
1. Es la técnica que mejor determina la masa de las moléculas 2. Da información sobre la estructura química de las moléculas ¿Qué nos permite obtener la espectrometría de masa? Identificar, verificar y cuantificar moléculas

35 Diagrama de un espectrómetro de masa
High Vacuum System Fuente de iones Analizador de masa Base de Datos Entrada Detector

36 MALDI: Matrix Assisted Laser Desorption Ionization
Muestra Laser hn Laser ioniza las moléculas. 2. Las molécules (M) se ionizan por transferencia de protones XH+ + M  MH+ + X. MH+ Grid (0 V) +/- 20 kV

37 El resultado que muestra el espectro de masas
Espectro MALDI TOF de IgG MH+ 10000 20000 30000 40000 Relative Abundance (M+2H)2+ (M+3H)3+ 50000 100000 150000 200000 Mass (m/z)

38 Summary: acquiring a mass spectrum
Ionization Mass Sorting (filtering) Detection Ion Source Ion Detector Mass Analyzer Form ions (charged molecules) Sort Ions by Mass (m/z) Detect ions 100 75 Inlet • Solid • Liquid • Vapor 50 25 1330 1340 1350 Mass Spectrum

39 Gracias por su atención
Fin Gracias por su atención