FLUJO DE INFORMACIÓN GENÉTICA

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NIVEL INTRACELULAR Replicación Transcripción Traducción NIVEL INTERCELULAR Conjugación Transformación Transducción 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

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4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

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MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL ADN

Replicación 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

REPLICACIÓN DEL ADN La replicación es un fenómeno esencial, preliminar a la reproducción y está coordinada con el ciclo de crecimiento y división celular. Se realiza por un mecanismo semiconservador que se lleva a cabo por las ADN polimerasas, que utilizan como molde el ADN existente.

REPLICACIÓN DEL ADN

TRANSCRIPCIÓN Proceso a través del cual se forma el ARNm a partir de la información del ADN con la finalidad de sintetizar proteínas. El ADN, como sabemos, presenta dos cadenas de polinucleótidos. En la síntesis o transcripción del ADN participa una de sus cadenas, que recibe el nombre de cadena molde, mientras que la otra cadena se le denomina complementaria.

TRANSCRIPCIÓN Se inicia cuando el ADN se abre por efecto de la enzima ARN polimerasa (ARNpol) dejando libre al ADN molde e iniciando el proceso de alargamiento del ARNm, mediante la complementariedad con la cadena molde del ADN: - Donde va la “A” se coloca la “T”, - Donde va la “T” se coloca la “U”, - Donde va la “G” se coloca la “C” y - Donde va la “C” se coloca la “G”. En el ADN existen secuencias específicas que indican al ARNpol donde termina la lectura del gen y provocan la culminación de la síntesis del ARNm

TRANSCRIPCIÓN El primer triplete de bases del ADN que codifica el primer aminoácido del GEN (esto lo realiza en el siguiente paso denominado TRADUCCIÓN) es TAC, por lo que el primer codón del ARNm es AUG. Los tripletes de bases de terminación presentes al final de cada gen son ATT, ATC ó ACT, que en la secuencia del ARNm se transcribirán como:

TRANSCRIPCIÓN En los procariontas, una vez formada la molécula de ARN o incluso antes de finalizar su síntesis, empieza a ser traducida en proteínas. En cambio, en las eucariontas, antes de transformarse en ARNm, ARNt, y ARNr, y traducirse en proteínas, tiene que pasar por un proceso de maduración. La maduración del ARN primario, se realiza en el núcleo de la célula, los ARN que resulten serán más cortos que el primario. Existen segmentos que se mantienen en el ARN maduro, a éstos se les llama EXONES, mientras que los que son descartados se llaman INTRONES. Al madurar el ARN adopta dos formas: ARNm y ARNt, éstos se convierten en los verdaderos ejecutores de las órdenes dadas por el ADN para la SÍNTESIS DE PROTEÍNAS.

LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTES
a) INICIACIÓN + 1 -35 -10 La subunidad (σ ) se disocia del promotor nun TRANSCRIPCIÓN DEL ADN. Transcripción en Procariotes: Como ya hemos visto anteriormente el mecanismo de trascripción, en estos organismos, también se da en fases con la ayuda de: 1. ARN Polimerasa 2. dNTPs (ATP, CTP, GTP, UTP)----> Ribonucleótidos 3. Factores accesorios que tienen su acción principal en cada fase: Iniciación :  (sigma): reconoce al promotor Elongación : nun: acelera el proceso de elongación Terminación :  (rho): reconoce las secuencias de terminación rho dependientes. Iniciación: En el gráfico a), observamos a la iniciación de la ARN polimerasa que se ubica entre la región -35 y -10 para iniciar su acción, mediante el acople de la subunidad , que le permite reconocer y fijarse a la secuencia del ADN o sitio promotor del gen que se va a transcribir. En la misma se observa el sitio +1 del cual ya hemos hablado antes (Ver estructura de los genes) Elongación: En el gráfico b), se observa que la subunidad  se disocia del sitio promotor. También aquí observamos que se acopla a la ARN polimerasa el factor nun, mientras va naciendo el ARN transcrito y vemos el movimiento de la enzima que va en sentido 5’ a 3’. -10 b) ELONGACIÓN 5´ 5’ Movimiento de la enzima 3´

OJAL DE LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTES
Movimiento de la enzima 5´ 3´ Cadena que codifica al DNA Punto de enrollamiento Punto de desenrollamiento En esta se observa en detalle los dominios de la enzima en los cuales tiene el efecto de: 1. Punto de desenrrollamiento: En esta la enzima tiene actividad de helicasa. 2. Punto de enrollamiento. 3. La cadena que codifica al ADN y la cadena molde de ADN que se esta transcribiendo (sentido 5’ a 3’) 4. Sitio de reconocimiento del promotor en la secuencia de ADN. 5. Híbrido entre la cadena de ADN y la cadena de ARN naciente o recién sintetizada. Cadena molde de ADN Sitio de unión al RNA Híbrido RNA-DNA

ELONGACIÓN DE LA TRANSCRIPCIÓN
EN PROCARIOTES Burbuja de Transcripción en la RNA polimerasa Movimiento de la polimerasa 5´ 3´ En la presente diapositiva, se observa la burbuja de transcripción que se forma al abrirse la cadena mediante la actividad de helicasa de la ARN pol. También se observa el crecimiento de la cadena de ARN, mientras la enzima ARN pol se mueve en sentido 5’ a 3’. La cadena de RNA crece

ASAS DE TERMINACIÓN DE LA TRASCRIPCIÓN EN PROCARIOTES
Estructura secundaria Región de unión de doble hélice Terminación: Durante esta fase, el ADN que se está transcribiendo, toma una forma de asa o de pinza de cabello para lo cual interviene el factor . Algunos genes son  dependientes y otros son  independientes (estos requieren de otros factores intrínsecos). Los factores  dependientes hacen uniones intracatenarias entre G y C. Los factores  independientes hacen uniones entre A y T. Unión en forma de pinza de cabello Unión en forma de asa

TRANSCRIPCIÓN DEL DNA EUCARIOTAS PROCARIOTAS RNAm citoplasma Núcleo
Exón intrón RNA Transcripción DNA Transcripción ARNm Empalme RNA Traducción En esta se observa de manera esquemática y general la transcripción de los genes para los organismos eucarióticos y procarióticos. En los primeros (izquierda) observamos la presencia de un ADN en el núcleo compuesto por Exones e Intrones, característicos de estos, los cuales mediante el mecanismo de transcripción producen ARNm que puede ser traducido o expresado a proteína en el citoplasma. En los procarióticos (derecha), observamos un ADN en un núcleo difuso, no delimitado, sin intrones ni exones, que se transcribe a ARNm para luego ser traducido o expresado a proteínas. Proteína RNAm Traducción Proteína

TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS
ADN Transcripción ARNhn inicial 5´ 3´ Clivaje inicial Transcrito (ARNhn) 5´ 3´ polirribonucleotidil adenosin sintetasa ARNhn - Poly A 5´ En esta diapositiva, se observa el mecanismo de transcripción en Eucariotas. La transcripción necesita los siguientes elementos en su mecanismo de acción: 1. ARN Polimerasa (I, II o III) 2. DNTPs (ATP, CTP, GTP, TTP)------>deoxinucleótidos 3. Factores accesorios que actúan en las tres fases, iniciación, elongación y terminación. En esta diapositiva observamos que a partir de un fragmento de ADN, se obtiene un fragmento de ARNm inicial que posee una orientación 5’ a 3’ con la ayuda de la ARN polimerasa (I, II o III), con la cual se da el proceso de la transcripción, mediante los siguientes pasos: 1. Se da una iniciación en la cual la ARN reconoce el sitio de acople a la cadena de ADN en la cual inicia la síntesis de ARN tomando como plantilla al ADN en la cual cambia en la secuencia a las timinas por uracilos. 2. Elongación: La enzima moviéndose del extremo 5’ a 3’ realiza un proceso de clivaje hacia el extremo 3’ al reconocer a la secuencia AAUAAA convirtiéndolo en un transcrito de ARN heterogéneo nuclear (ARNhn). Acto seguido, debido a la acción de la polirribonocleotidil adenosin sintetasa se une a este extremo un tallo de poliadeninas o Poly A, convirtiendo a este complejo en lo que se llama ARNhn-Poly A. 3. Después se da un “procesamiento” que hace que el extremo 5’ se clive y se degrade. Posteriormente, en este extremo 5’ actúan las nucleasas y la 7 metil guanosina (7mG) la cual hace que este extremo se curve formando como una caperuza para formar lo que se llama el sitio cap. En este momento ya esta listo el ARNm para ser traducido a proteínas en el citoplasma de la célula. El sitio de poliadenilación y el sitio cap, además de ser sitios de reconocimiento para enzimas que posibilitaran posteriormente la traducción a proteínas, también sirven para proteger de la degradación de este ácido nucléico (ARNm) de una sola cadena, por las enzimas ribonucleasas. Se cree que estos dos extremos (5’ y 3’) que sufren este mecanismo de clivaje, no poseen regiones codificantes para el gen. Reacción General de la Transcripción: 1 molécula de ADN + ribonucleótidos n en presencia de ARN pol y moléculas accesorias, produce (moléculas de ARNm + 2 pirofosfatos)n. Cada envoltura nuclear en eucariotas tiene aproximadamente 3000 complejos de poro por medio de los cuales importa y exporta proteínas y ARNm(s). De estos últimos, exporta aproximadamente 1 por poro, por minuto. En la siguientes tres dispositivas, veremos un interesante mecanismo que explica en gran medida la amplia variabilidad de las proteínas en los organismos eucariotes que se da generalmente en las regiones codificantes del gen durante la transcripción de los genes, los cuales como ya sabemos poseen exones e intrones. Fragmento 5´ + ARNhn - Poly A Procesamiento 7mG Nucleasas ARNm - Poly A con Cap + Fragmentos 5´degradados 7mG 5´cap

GEN INTERRUMPIDO E I E I E I E GEN
Es una secuencia de “palabras” y sus “silencios” o “espacios conectores”; escritas con un alfabeto de solo cuatro letras A, T, C, y G y con los cuales se “escribe” el mensaje cifrado de nuestra herencia. Así, a cada palabra le llamamos EXON (E) y a cada silencio le llamamos INTRON (I) E I E I E I E Antes que todo, recordemos: Que es un gen interrumpido? Es una secuencia de “palabras” (sustantivos, sus preposiciones, verbos, adverbios, artículos, palabras conectoras) y “espacios conectores”, escritas con un alfabeto de solo 4 letras A, T, C y G con los cuales se “escribe” el mensaje cifrado de nuestra herencia. Así entonces, para los eucariotas, a cada “palabra” la llamamos EXON (E) y a cada “espacio conector”, lo llamamos INTRON (I). Recordemos que los procariotas no tienen intrones. GEN Los procariotas no tienen intrones

QUÉ ES UN GEN? E I E I E I E ATCTCGGTTAAATGCGG TACAGGTATAGGACAG A LA
VAMOS A LA CASA Qué es un Gen?: En esta observamos dos ejemplos de mensaje: En el primer ejemplo, vemos a la palabra “vamos” y “a” como un “exón” y a los espacios conectores como “intrón”, que corresponderían en el lenguaje de los genes a secuencias específicas para cada caso. De igual manera se observa el segundo ejemplo, “Trae” y “la” son “exones” con sus espacios conectores. ATCTCGGTTAAATGCGG TACAGGTATAGGACAG A LA

BARAJAMIENTO (SPLICING) DIFERENCIAL DE EXONES
E I E I E I E4 VAMOS A LA CASA E E E3 VAMOS A LA E E E4 A LA CASA Barajamiento (Splicing) diferencial de los Exones: En el ejemplo vemos el “mensaje” VAMOS A LA CASA, cuyas palabras corresponden a un orden específico en la secuencia del mismo, cuya organización es dado por la secuencia de la información implícita para el ejemplo, y que ha sido “asignada” a los Exones. Así entonCes, si cambiamos ese orden de la secuencia de los exones obtenemos una diferente información (diferentes ARNm) para cada caso según cada ejemplo de orden, tal como se observa en la dispositiva, lo que desde el punto de vista de la Biología Molecular significa una gran variabilidad y la posibilidad de síntesis de diferentes proteínas a partir de un mismo gen. E E4 A CASA E E3 VAMOS LA

TRADUCCIÓN Es la última etapa de la síntesis de las proteínas. En esta etapa los codones sintetizarán las proteínas a partir de la información que es presentada por el ARNm al ARNt.

PROCESO DE TRADUCCIÓN La traducción del ARNm tiene lugar en 4 etapas 1. Activación 2. Iniciación 3. Elongación 4. Terminación Al final del proceso tiene lugar la maduración de la proteína formada

ETAPAS DE LA TRADUCCIÓN
1. ACTIVACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS La activación de los aminoácidos para formar los complejos de transferencia tiene lugar en el citoplasma y es el paso previo necesario para que pueda comenzar la traducción. Consiste en la unión de cada aminoácido a su ARNt específico mediante la intervención de un enzima, la aminoacil-ARN-t sintetasa y el aporte de energía del ATP. aa1 + ARNt1 + ATP ----→ ARN t1-aa1 + AMP + PPi La unión del aminoácido al ARN-t tiene lugar por el extremo 3' del ARN-t. Todos los ARN-t en su extremo 3' contienen la secuencia 3' ACC 5'. Las aminoacil-ARN-t-sintetasas tienen tres zonas distintas: - Una para el reconocimiento del aminoácido - Otra para el ARNt - Otra para el ATP. Debe existir al menos una aminoacil-ARN-t-sintetasa diferente por cada ARN-t distinto. El ARNt se une a la aminoacil-ARN-t-sintetasa a través del lazo dihirouracilo (DHU).

Traducción 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

TRADUCCIÓN A PROTEÍNAS
Estructura del ARNt: En esta se observa, que tiene forma de “una mano de 4 dedos”, en la cual se observa hacia el lado 3’, la secuencia AACCA, la cual es reconocida por la RNA sintetasa que colabora para que este RNA porte alli el aminoácido. Del mismo modo, observamos los “dedos de esta mano transportadora” que están formados por la complementariedad que ocurre entre las bases que las componen.. Estos reciben el nombre de Asa D, Asa Tψ CG y el Asa Anticodón. Las dos primeras asas, parece que permiten una estabilidad a la estructura del ARNt al igual que el asa pequeña no complementaria; y la tercera Asa es la que tiene el papel específico de realizar la traducción exacta de la tripleta o Codón del código genético (en el ARNm) y por esto a esta Asa se le llama Anticodón. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

INICIACIÓN La iniciación de la replicación comienza siempre en una secuencia específica de nucleótidos conocida como origen de la replicación, en el que hay un gran contenido de Adenina y Timina. Requiere una serie de proteínas iniciadoras especiales (proteínas desestabilizadoras de la hélice) y enzimas conocidas como helicasas, que rompen los puentes de hidrógeno abriendo la hélice, formándose las horquillas de replicación, una a cada lado de la burbuja a que da lugar la separación de las ramas del ADN.

INICIACIÓN Una vez abierta la cadena de ADN se unen otras proteínas y enzimas adicionales: Proteína SSB (proteínas de unión a cadena): no permiten que el ADN se vuelva a naturalizar o formen estructuras secundarias. Las enzimas Topoisomerasas: evitan que se retuerzan y formen superenrollamientos cortando una o más hebras del ADN aliviándolos

2. INICIACIÓN El RNAm llega hasta el ribosoma que está separado en sus dos subunidades y se une a la subunidad mayor; a continuación se une la subunidad menor. En los ribosomas existen dos lugares en los que pueden caber transferentes, el llamado Sitio-P (= peptidil) y el Sitio-A (= aminoacil). El RNAm se une de tal forma que el primer codón se coloca en el sitio P. Fig.Iniciación de la traducción (Tomada de

LA TRADUCCION A PROTEINAS. Este proceso, que se lleva a cabo ahora en el citoplasma, se da básicamente en 3 fases. En la diapositiva, observamos los componentes actuantes en el proceso de la traducción: a. La secuencia del ARNm que se va a traducir a proteínas en forma de tripletas: Cada tripleta de ribonucleótidos corresponde a un aminoácido específico. “El código genético se lee en forma de tripletas” b. El ribosoma, con su subunidad grande y la pequeña, en la cual se observan los sitios aminoacil (donde entra el aminoácido) y peptidil (en donde va creciendo la cadena de aminoácidos). c. ARNt o de transferencia con y sin el aminoácido. Este es el transportador del aminoácido. d. Cadena de aminoácidos o polipeptídica. Gráfico inferior: La fase de iniciación, se da cuando el ribosoma se adhiere a la cadena de ARNm en la primera tripleta llamada o codón AUG y al mismo tiempo, el ARNt, con su secuencia anticodón (UAG), asigna el primer aminoácido de la cadena de aminoácidos que será sintetizada. Nota: Las fases de la traducción a proteínas, responden a unos codones o tripletas específicas, para demarcar cada una tal como se definen a continuación: Iniciación: AUG Elongación: Todas las tripletas que codifican para aminoácidos específicos. Terminación: UAG , UAA y UGA 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

ELONGACIÓN Durante la iniciación de la replicación, la doble hélice de ADN se abre por acción de una helicasa. A continuación, una molécula de ADN polimerasa se une a una de las hebras de ADN (catalizan la síntesis real de las nuevas cadenas) Se mueve recorriendo la hebra usándola como molde para ir sintetizando la cadena líder, añadiendo nucleótidos y recomponiendo la doble hélice. Sólo es capaz de sintetizar nuevo ADN en sentido 5` ` partiendo de un ARN corto específico (ARN cebador)

ELONGACIÓN El ARN cebador es una molécula formada por nucleótidos de ARN catalizados por enzimas ARN primasas. Durante la síntesis, en cada horquilla de replicación se van formando dos copias nuevas, sobre cada una de las dos hebras de ADN que se separaron en la fase de iniciación.

TRADUCCIÓN A PROTEÍNAS
La fase de elongación se da en tres pasos: Paso No. 1 de elongación: En la grafica A, se observa al ribosoma recorriendo la cadena de ARNm. El sitio aminoacil ya ha recibido el aminoácido y trasladado el mismo al sitio peptidíl para que se comience el primer “eslabón” en la cadena de aminoácidos que formaran la proteína completa. En la grafica B, se observa que el ARNt (anticodón GCA) ya ha reconocido la segunda tripleta en el ARNm (codón CGU). ELONGACIÓN A B F C N R AUG CGU UAC GCA AGA. GCU. UGA La fase de elongación se da en tres pasos: Paso No. 1 de elongación: En la grafica A, se observa al ribosoma recorriendo la cadena de ARNm. El sitio aminoacil ya ha recibido el aminoácido y trasladado el mismo al sitio peptidíl para que se comience el primer “eslabón” en la cadena de aminoácidos que formaran la proteína completa. En la grafica B, se observa que el ARNt (anticodón GCA) ya ha reconocido la segunda tripleta en el ARNm (codón CGU). AGA. GCU. UGA.

a) Formación de una horquilla de replicación b) Síntesis por la DNA-polimerasa de la hebra conductora (izquierda) y de la hebra seguidora en fragmentos de Okazaki (derecha) c) Unión de todos los fragmentos por la DNA-ligasa

TERMINACIÓN Terminación de la Traducción: Este proceso termina cuando el complejo ribosoma-ARNt y moléculas accesorias, encuentra en la cadena de ARNm una tripleta o codón de parada, como UAA, UAG y UGA. En la gráfica se muestra el momento en el cual el ribosoma encuentra la tripleta o codón de parada UGA, determinando así el fin de la traducción. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

TERMINACIÓN Cuando una ADN polimerasa hace contacto con el extremo del otro fragmento de Okazaki contiguo el ARN cebador de este es eliminado y otra enzima, la ADN ligasa, conecta los dos fragmentos de Okazaki de ADN recién sintetizado, catalizando las reacciones de condensación que unen los grupos fosfatos y azúcar de los nucleótidos contiguos, y así una vez unidos todos los fragmentos de Okazaki se completa la doble hélice de ADN La ADN polimerasa III no puede empezar de cero, necesita un extremo OH libre en donde unir el primer nucleótido, por eso se requiere un primer ARN primasa. Lectura: 3` ` Síntesis: 5` ` Entonces hay una hebra líder y una hebra retrasada.

TERMINACIÓN Una vez terminada la copia de ADN, deben remover los pedazos de ARN (ADN polimerasa I) y unir toda la cadena (ligasa). En la copia puede haber errores (mutaciones) que en general son corregidas simultáneamente por LA ADN polimerasa III

Transferencia genética extracelular
Transducción 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Tipos de transducción Lítica (destrucción celular) Lisogénica (no hay destrucción celular) 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Conjugación 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Transformación 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Técnicas utilizadas 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Enzimas utilizadas en la tecnología del DNA recombinante

Existen más de 90 enzimas de restricción purificadas y caracterizadas. Nombre: abreviatura tres letras que se refiere al organismo, seguida de un número romano EcoRI Escherichia coli HindIII Haemophilus influenzae HaeIII Haemophilus aegyptius FRAGMENTO DE RESTRICCIÓN: Fragmentos de ADN generados por una determinada enzima de restricción. Mapa de restricción 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Endonucleasas de restricción tipo II

ROTURA DE MOLÉCULAS DE DNA EN FRAGMENTOS REPRODUCIBLES MEDIANTE ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN Las enzimas de restricción sólo reconocen y cortan secuencias específicas. Generan extremos cohesivos (con monocadenas) o extremos romos. La rotura del DNA produce una serie característica de fragmentos, y estos se pueden ligar a otros DNA, como el vector de clonación cortado (plásmido). La reacción de ligación está facilitada por el apareamiento de extremos cohesivos complementarios, y los fragmentos de DNA con extremos cohesivos diferentes (no complementarios) no suelen ligarse. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

POLICONECTOR 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Separación de DNA de diferentes tamaños
Electroforesis en gel Poliacrilamida fragmentos menores de 500 pb Diluciones diluidas agarosa Electroforesis en gel de campo pulsante Visualización Colorante bromuro de etidio Marcaje radiactivo (32P) antes de electroforesis 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Secuenciación del DNA 5’-32P-GCTACGTA-3’
Determinación de la secuencia exacta de un ácido nucleico A. Maxam y W. Gilber Por hidrólisis química específica Hebra de DNA marcada en el extremo 5’ con 32P 5’-32P-GCTACGTA-3’ 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Secuenciación DNA método Sanger

Hibridación de ácidos nucleicos

Método de transferencia Southern aplicado a la determinación de la huella dactilar de DNA 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Clonación de DNA 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Tipos de vectores de clonación utilizados en E. coli

Plásmidos Moléculas de DNA circular que se replican aparte del cromosoma bacteriano El plásmido es una molécula circular de DNA que tiene una existencia independiente en la célula. Los plásmidos son muy abundantes en las bacterias, y mas escasos en las células eucariotas. Llevan en su seno varios genes, a menudo responsables de características útiles para la célula. Por ejemplo, la capacidad para soportar concentraciones tóxicas de un antibiótico, como el cloranfenicol o la ampicilina. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Conjugación Los plásmidos se pueden clasificar en dos grupos: conjugativos y no conjugativos. Los conjugativos tienen la capacidad de promover la conjugación. El plásmido F de E. coli es capaz de integrarse en el cromosoma. Cuando la conjugación tiene lugar en esta situación, parte del cromosoma se transfiere a la cepa F-. Solo los plásmidos conjugativos tienen la capacidad de ser transferidos en la conjugación. A veces, en presencia de un plásmido conjugativo, otro plásmido puede transferirse. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Plásmido pBR322 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Clonación de un DNA foráneo en E. coli con pBR322

Vectores de clonación del bacteriófago λ

Clonación con cósmidos

GLOSARIO Bacteriófago: Virus que infecta a Bacterias. También llamado fago. Cebador o primer: Molécula de ácido nucleico, de cadena simple, que hibrida a una hebra molde de tal manera que su extremo 3’ queda disponible para servir como inicio de la síntesis de la nueva hebra de ADN complementario al molde. Es necesario para la síntesis de ADN por las enzimas polimerasas. Codón: Triplete de bases que específica un aminoácido. Codón de iniciación: Codón en el ARN mensajero que indica al ribosoma el lugar donde debe comenzar la síntesis de la proteína. Comúnmente es 5’ AUG 3’. Codón de terminación: Uno de los tres codones en el ARN mensajero que causa una terminación de la síntesis de proteínas. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Conjugación: Transferencia de material genético de una bacteria a otra mediante contacto físico entre las células. En Escherichia coli, el contacto ocurre mediante una estructructura especial denominada pilus. Cromosomas: Componentes de las células que contienen la información genética. Cada cromosoma tiene numerosos genes. Siempre se presentan en pares, uno proviene del padre y el otro de la madre. Los cromosomas de pares diferentes son a menudo visiblemente distintos entre ellos. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Electroforesis en gel: Proceso para separar moléculas forzándolas a migrar a través de un material semisólido (gel) bajo la influencia de un campo eléctrico. Electroporación: Técnica que emplea una corriente eléctrica para crear poros transitorios en una menbrana celular por los cuales puede introducirse el ADN. Endonucleasa: Enzima que rompe un ácido nucleico en una unión fosfodiéster no terminal. Un tipo de endonucleasas, las enzimas de restricción, reconocen secuencias específicas de bases a lo largo de una molécula de ADN y la rompen después del reconocimiento. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Enzima: Proteína que acelera la velocidad de una reacción química. Las enzimas son catalizadores que promueven reacciones repetidamente sin sufrir ningún cambio. Enzimas de restricción: Enzima que reconoce una secuencia específica de bases en el ADN y rompe la molécula en esa secuencia o en un sitio cercano a ella. La secuencia de reconocimiento se denomina sitio de restricción. Diferentes enzimas de restricción reconocen diferentes sitios de restricción. Se denominan también endonucleasas de restricción. Enzimas reparadoras de ADN: Proteínas que reconocen y reparan anormalidades en el ADN. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

Gen: Unidad de información hereditaria. Sección de una molécula de ADN que especifica la producción de una proteína particular. Genoma: El total del material hereditario de una célula. 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

GRACIAS 4/9/2017 Mg. Q.F. Jéssica N. Bardales Valdivia

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