Universidad Nacional Autónoma de México FES Iztacala “evaluación de degradación celular en Raphanus sativus L. causada por riego de aguas residuales industriales.

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1 Universidad Nacional Autónoma de México FES Iztacala “evaluación de degradación celular en Raphanus sativus L. causada por riego de aguas residuales industriales de una planta tratadora de Tlalnepantla Edo.Mex.” INTEGRANTES : Mart í nez Nolasco Hazete Moreno Patl á n Mario Ivan Ortega Salinas Jessica Citlalli Reyes Medina Carlos Ulises

2 AGUA RESIDUAL Color, Olor. Color, Olor. Lodos arenas y gravas Composición químicas Composición físicas sales minerales, compuestos cormo sulfatos, carbonatos, que pueden sufrir algunas fenómenos de óxido- reducción.

3 Agua residual Agua (99%) Sólidos (0.1%) Orgánicos Inorgánicos Residuos, Minerales Pesados Sales Metales Proteínas (65%) Carbohidratos (25%) Lípidos (10%)

4 El 63% del agua proviene de ríos, arroyos y lagos, el resto de aguas subterráneas. Estadísticas al 2009 el 76.7% le correspondía al agrícola. La superficie sembrada varía entre 20 y 23 millones de hectáreas anualmente. Aguas de riego representa 6.5 millones de hectáreas 85 Distritos de Riego

5 Muerte celular programada Mecanismo por el cual se regula una serie de procesos fisiológicos lento proceso de senescencia, pérdida de la clorofila,(color pardo en hojas) marchitez abscisión de la hoja.

6 A nivel celular El rol de las vacuolas en la digestión progresiva de orgánelos. Los cloroplastos desaparecen primero, luego las mitocondrias y finalmente el núcleo.por carencia de nutrientes asociada a la autofagia en cultivos celulares

7 ANTECEDENTES Ramírez Pisco 2006. BIOSÓLIDOS PROCEDENTES DEL TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES PARA USO AGRÍCOLA Y SU EFECTO SOBRE EL CULTIVO DE RABANO ROJO (Raphanus sativus L.). BIOSÓLIDOS PROCEDENTES DEL TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES PARA USO AGRÍCOLA Y SU EFECTO SOBRE EL CULTIVO DE RABANO ROJO (Raphanus sativus L.). Berrueta M.D 2011 MUERTE CELULAR INDUCIDA POR CONDICIONES AMBIENTALES ADVERSAS EN Calibrachoa parviflora ESTUDIO DE LA POLIMERIZACIÓN DE FENOLES UTILIZANDO PEROXIDASAS PRESENTES EN RÁBANO COMÚN (Raphanus sativus var sativus), CON APLICACIÓN EN LA BIORREMEDIACIÓN DE AGUAS RESIDUALES DE UNA EMPRESA TEXTILERA Rafael Vargas 2011

8 En México es un país que abastece sus cultivos con aguas residuales de sus zonas urbanas. los compuestos presentes en aguas residuales y las consecuencias de sus usos en la agricultura es un tema de actualidad en varios países de la región hispanoamericana. Debido al uso de estas aguas dando siesgos no solamente a la planta si no también a la población que consume estos productos se pretende determinar si las afectaciones que ocasionan son o no admisibles el rábano es una especie idónea para este tipo de evaluación están, el de ser una planta de rápido crecimiento (cinco semanas) y presentar un contacto directo entre el sustrato y la parte comestible. justificación

9 Objetivo General Evaluar el efecto del riego con aguas residuales sobre plantas de en Raphanus sativus L condiciones de invernadero. Objetivos Específicos +Obtener los valores de área foliar y necrosis utilizando el software imagej®. +Determinar el contenido de clorofila a, clorofila b y carotenoides. +medir la presencia de metales pesados por espectrofotomefria atómica + evaluación de degradación de ADN por técnica cometa

10 germinación Parte de la variabilidad de resultados se relaciona con las condiciones ambientales a las que se somete la semilla para promover la germinación, en especial con el nivel de sombra. bajo condiciones óptimas, conforme aumenta el tiempo de almacenamiento, la viabilidad de la semilla desciende paulatinamente (Hartmann y Kester, 1998). 102 semilla Agua potable Agua residual 10 ml diarios perlita Tierra y composta Tierra y composta algodón perlita Tierra y composta Tierra y composta algodón

11 Cultivo de la planta 10 plantas Agua potable 50% AP 50% AR 50% AP 50% AR Agua residual grupos Tipo de riego 8 onzas a cada planta cada tercer día

12 Técnicas metales pesados Cuantificación de azucares y almidon. Cuantificación de clorofila Técnica cometa Determinación de necrosis

13 METALES PESADOS - son tóxicos -alteran el metabolismo y pueden provocar hasta su muerte. - Metales como el cromo y el zinc son utilizados por los organismos en cantidades pequeñas,se les conoce como oligoelementos -pueden ingresar a los organismos a través de la cadena alimenticia, en la cual se pueden concentrar a medida que ésta avanza.

14 Metales pesados - tienen capacidad para intercambiar cationes del suelo por el contenido de los residuos que son aplicados. -Junto con la materia orgánica controlan la toxicidad de los materiales pesados en las plantas. -Estos elementos son estables y se constituyen como nutrientes para las plantas (Na+, K+, Mg++ y Ca++)

15 Técnica de absorción atómica La extracción de metales consiste en separar los metales mediante un solvente patron La extracción de metales consiste en separar los metales mediante un solvente patron La cantidad extraída representa la concentración en el equilibrio obtenido en el contacto de las fases involucradas La cantidad extraída representa la concentración en el equilibrio obtenido en el contacto de las fases involucradas

16 VARIACIÓN DE AZÚCARES SOLUBLES Y ALMIDÓN EN HOJAS La síntesis neta de azúcar y la capacidad de exportación aumentan durante el desarrollo de la hoja, las hojas presentan diferencias en el metabolismo de estos dos azúcares de transporte durante el desarrollo de las hojas

17 La cuantificación del almidón puede proveer una medida exacta de la fluctuación en las reservas almacenadas Debido a la función preponderante de los carbohidratos no estructurales en el crecimiento almidon

18 se cuantificaran por el método colorimétrico de Nelson-Somogyi se obtendra por diferencia de los valores de los azúcares solubles totales menos los reductores direc-tos. Las muestras se filtraran y el extracto alcohólico se utiliza para su cuantificación el residuo se emplea para medir almidón por el método de la diastasa Técnicas para semillas en germinación Azucares y almidon Los azúcares reductores directos azúcares no reductores

19 La muerte celular programada pueden afectar las reacciones fotoquímicas de la fotosíntesis, alterando la síntesis de los pigmentos fotosintéticos como clorofila a. CUANTIFICAIÓN DE CLOROFILA

20 MUERTE CELULAR

21 forma de muerte celular caracterizada por distintos cambios morfológicos en la célula condensación de la cromatina fragmentación nuclear pliegues en la membrana plasmática contracción celular

22 Detectar el daño in vitro o in vivo causado al ADN en células individuales migración del ADN por rupturas simples en la hebra del ADN Células sometidas a una electroforesis. Los fragmentos de ADN migran fuera del núcleo celular y forman una cola

23 Consiste en los siguientes pasos obtener las células fijarlas con agarosa en un portaobjetos Someterlas a una solución de lisis (Triton X-100, 2.5 M NaCl) con la finalidad de romper su membrana celular Someterlas a una solución de lisis (Triton X-100, 2.5 M NaCl) con la finalidad de romper su membrana celular desenrollar el ADN en una solución amortiguadora (NaOH 0.3M) desenrollar el ADN en una solución amortiguadora (NaOH 0.3M) realizar la electroforesis la determinación del daño Longitud del halo clasificación del grado de daño en el ADN. clasificación del grado de daño en el ADN.

24 Muerte accidental, pasiva e indiscriminada causada por agentes externos, debido a la acumulación de moléculas fitotóxicas ; de moléculas especificas después de un evento traumático y es irreversible. (H2O2). la necrosis

25 afecta se traduce como un aumento en la senescencia de las plantas ya que las EROS son las principales oxidantes de proteínas, ácidos nucleicos, lípidos y otras biomoléculas como la clorofila. el uso de aguas negras puede provocar estrés oxidativo mediante las especies reactivas de oxígeno (EROS), Se caracteriza por la perdida progresiva de la integridad de la membrana que resulta en la liberación de los componentes celulares.

26 Técnica La proporción entre el áera total de las hojas y de tejido necrosado se determinara con el procesamiento y análisis de imágenes con el programa Imagej. (10mL de glicerol, 10mL de fenol, 10mL de acido láctico y 10mg de azul tripano al 5% disueltos en 10 mL de agua destilada) según el método de Keogh El grado de necrosis sera evaluado en las hojas enteras, las cuales se teñiran con solución de azul tripano.