MÉTODOS DE ANÁLISIS DE IMPUREZAS

Presentación del tema: "MÉTODOS DE ANÁLISIS DE IMPUREZAS"— Transcripción de la presentación:

1 MÉTODOS DE ANÁLISIS DE IMPUREZAS
Docente: DR. OMAR MARTIN GOMEZ HERNANDEZ

2 Diferentes Clases De Ensayos Analíticos
Clase A: Para establecer identidad Clase B: Para detectar y cuantificar impurezas Clase C: Para determinar cuantitativamente la concentración Clase D: Para evaluar las características, disolución, uniformidad de contenido Clasificación OMS (Inf. 32, Anexo 5 Validación de métodos analíticos)

3 Introducción La pureza de los reactivos es fundamental para la exactitud que se obtiene en cualquier análisis; por lo que es importante que la calidad de un reactivo se consistente en el uso al que se destina. Las sustancias y reactivos químicos producidos por la industria química pueden contener una cierta cantidad de impurezas, tales como metales pesados, inertes y otros. Cuando se realizan cálculos estequiométricos es necesario tener en cuenta el porcentaje de pureza de estos reactivos.

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5 Definiciones de impureza “FEUM”
FÁRMACOS: En un fármaco, a cualquier sustancia presente que no es la entidad química definida como el fármaco mismo. Sustancias relacionadas. Son los compuestos similares al fármaco que pueden generarse durante su proceso de obtención. Producto de degradación. Toda molécula resultante de un cambio químico en la molécula del fármaco, producida con el tiempo y por la acción de, por ejemplo, luz, temperatura, pH, agua, o por reacción con un aditivo y/o el envase primario/sistema contenedor-cierre. También conocido como producto de descomposición.

6 Definiciones de impureza “FEUM”
Perfil de impurezas. Una descripción de las impurezas identificadas y no identificadas presentes en un fármaco. Impureza identificada. Impureza para la cual se ha alcanzado su caracterización estructural. Impureza no identificada. Una impureza para la cual no se ha alcanzado su caracterización estructural y que está definida únicamente por sus propiedades analíticas cualitativas (por ejemplo: tiempo de retención cromatográfico).

7 Definiciones de impureza “FEUM”
Intermediario. Un material producido durante las etapas del proceso de obtención de un fármaco que experimenta un cambio molecular adicional o una purificación antes de convertirse en un fármaco. Los compuestos intermedios pueden ser o no ser separados. Impureza específica. Es aquella impureza conocida y descrita en la monografía. Es determinada mediante un criterio específico de aceptación. Puede ser identificada o no identificada. Impureza no específica. Una impureza que está limitada por un criterio de aceptación general, que no se encuentra listada de manera individual con su propio criterio de aceptación en la especificación de la monografía del fármaco.

8 Definiciones de impureza “FEUM”
Impurezas orgánicas volátiles (Disolventes residuales). A los compuestos químicos orgánicos volátiles que permanecen después de la fabricación de fármacos, aditivos o medicamentos.

9 Aplicación De Métodos Analíticos Para La Identificación de Impurezas
Cromatografía de líquidos de alta eficiencia Aplicación en: ensayos de contenido, caracterización de impurezas (acoplada con espectroscopia de masas), determinación de impurezas y ensayos de estabilidad Cromatografía de gases Aplicación en: ensayos de contenido, caracterización de impurezas (acoplada con espectroscopia de masas), determinación de impurezas y determinación de impurezas orgánicas volátiles (solventes residuales) Espectrofotometría UV-Visible Aplicación en: ensayos de contenido, ensayos de disolución y determinación de impurezas

10 ANALISIS DE IMPUREZAS EUTECTICAS

11 La base de cualquier método de pureza por calorimetría es la relaci6n entre la fusión, la disminución de la temperatura de congelación y el nivel de impurezas. La fusión de un compuesto se caracteriza por la absorción del calor latente de fusión, a una temperatura especifica . En teoría una transición de fusión para un compuesto absolutamente puro y cristalino, se debe presentar dentro de un intervalo infinitamente estrecho. La ampliación del intervalo de fusión debido a impurezas, proporciona un criterio de pureza bien definido.

12 El efecto se visualiza fácilmente al examinar los termogramas de las muestras que difieren en unas decimas de porcentaje en contenido de impurezas. Un material que tiene una pureza del 99 % presenta aproximadamente un 20 % del mismo que funde 3 °C abajo del punto de fusión del material puro Los parámetros de fusión se obtienen fácilmente del termograma de una determinaci6n de fusión simple, usando una cantidad pequeña de muestra y el método no requiere de otras mediciones de temperatura, múltiples y precisas. Las unidades del termograma se pueden convertir directamente a trasferencia de calor, milicalorias por segundo.

13 El procedimiento se basa en que el descenso del punto de congelación de soluciones diluidas cuyas moléculas son de tamaño casi igual, se expresa mediante la ecuación de Van't Hoff modificada:

14 Cuando se establece el supuesto de que el intervalo de temperatura del ensayo es pequeño y que no se forma una solución sólida, es decir, que el soluto (impureza) no forma con el componente de mayor proporción (sustancia de interes) una solución en el estado sólido, el valor de K = 0

15 Por lo que la integración de la ecuación de Van't Hoff produce la siguiente relación entre la fracción molar de la impureza y el descenso de la temperatura de fusión:

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17 VALORACIÓN MICROBIOLOICA DE MEDICAMENTOS
La potencia o actividad de los antibióticos se calcula comparando el grado de inhibición de microorganismos sensibles y específicos producida por concentraciones conocidas del antibiótico analizado y una sustancia de referencia. En los antibióticos puede haber ligeros cambios químicos que se traducen en perdida de actividad antimicrobiana que no pueden demostrarse por métodos químicos. En caso de duda respecto a la actividad de un antibiótico, los métodos de valoración microbiologica prevalecen sobre los métodos químicos.

18 Método de cilindro en placa (Difusión en Agar)
Se basa en la difusión del antibiótico desde un cilindro vertical, a través de una superficie con agar inoculado con el microorganismo de prueba. La difusión origina zonas de inhibición del microorganismo cuyo tamaño esta en relación con la concentración del antibiótico. Método turbidimetrico. Se basa en medir espectrofotométricamente el crecimiento del microorganismo de prueba en un medio de cultivo liquido que permite su rápido crecimiento y en el que al adicionar concentraciones crecientes del antibiótico se inhibe el crecimiento en forma proporcional a la concentraci6n adicionada.

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22 VALORACIÓN DE ANTIBIÓTICOS BETALACTÁMICOS
Se basa en la inactivación de las penicilinas por rompimiento hidrolítico del anillo betalactamico por la acción catalítica de un álcali. El producto resultante es acido peniciloico el cual consume yodo. Para el análisis se prepara un blanco y una muestra, esta es inactivada con hidróxido de sodio, a ambos se añade un exceso de solución valorada de yodo. El yodo no consumido se titula con tiosulfato de sodio y la diferencia en los volúmenes de solución de yodo consumido se relaciona al contenido de penicilinas de la parte alícuota que se midió.

23 PRUEBA LÍMITE DE ARSENICO.
Esta prueba se basa en la secuencia de dos reacciones químicas cuantitativas llevadas a cabo bajo condiciones establecidas, a partir del arsénico contenido en un producto dado. En la primera reacción, el arsénico, en presencia de hidrogeno, forma arsina. En la segunda reacción, la arsina así fornada, reacciona con una SR de dietilditiocarbamato de plata, formandose un compuesto colorido, el cual es valorado por espectrofotometria. En medio ácido el arsénico se reduce a arsina pm el zinc; Ia arsina reacciona con dietilditiocarbamato de plata formando un complejo soluble de color rojo que es proporcional al contenido de arsénico en la muestra, el cual es valorado por espectrofotometria visible. Hay dos métodos para la cuantificacion, el método I para materiales inorgánicos y el método II para orgánicos.

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25 ASPECTO DE LA SOLUCIÓN Este método se basa en Ia comparación visual de la claridad u opalescencia de Ia muestra en solución contra patrones de referencía bajo condiciones establecidas.

26 IDENTIFICACION DE BASES ORGANICAS NITROGENADAS
Esta prueba es para Ia identificacion de aminas terciarias.

27 DETERMINACION DE ClOROBUTANOl
El método se basa en la determinación cuantitativa por cromatografía de gases del clorobutanol, contenido como agente antimicrobiano en ciertos productos.

28 lÍMITE DE ClORUROS Esta prueba se basa en la reacción de precipitación de los cloruros presentes en una muestra dada con una solución de nitrato de plata, produciendo un precipitado de color blanco de cloruro de plata, el cual se compara visualmente contra el precipitado producido por una cantidad conocida de cloruros.

29 COLOR DE LA SOLUCIÓN EI método se basa en la comparación visual del color de la muestra en solución, contra patrones de referencia en un intervalo colorido especifico, bajo condiciones establecidas. EI color que presenta la muestra, de acuerdo al método que indique la monografía individual, estará dentro del intervalo café-amarillo- rojo. Una solución se considera incolora si su aspecto es el mismo que el del agua o del disolvente utilizado para reconstituirla.

30 TEMPERATURA DE SOLIDIFICACIÓN
Es la temperatura en la cual una sustancia pasa del estado líquido al estado solido al ser sometida a enfriamiento, esta temperatura es una constante física que proporciona información sobre la identidad y pureza de Ia sustancia en prueba. Las sustancias puras tienen un punto de solidificación bien definido, pero las mezclas generalmente solidifican dentro de un intervalo de temperaturas.

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32 DIFRACTOMETRIA DE RAYOS X DE POLVOS
Toda forma cristalina de un compuesto produce su propio patrón característico de difracción de rayos X cuando se irradia Ia muestra con un haz de rayos X, y difractograma obtenido constituye Ia carta de identidad de esta estructura cristalográfica. La medida precisa de la posición y la intensidad de todos y cada uno de los picos de difracción permiten determinar Ia naturaleza y eventualmente Ia eoncentracion de las diferentes fases cristalinas que constituyen Ia muestra.

33 Las técnicas de difracción de polvos se emplean más comúnmente para la identificación rutinaria y la determinación de Ia pureza relativa de los materiales cristalinos Los métodos de análisis de polvos proporcionan una ventaja sobre otros métodos de análisis, ya que generalmente no son destructivos por naturaleza.

34 Los datos de difracción de un cristal único se utilizan principalmente para Ia determinación de pesos moleculares y el análisis de las estructuras del cristal a nivel atómico.

35 La difractometria de rayos X es una técnica de elección para:
a) La caracterización y el conocimiento del principia activo. b) El seguimiento de su integridad durante su inclusión en la forma farmacéutica y durante los estudios de estabilidad y de envejecimiento. c) La identificación rapida de los principios activos o de los excipientes. d) Identificación de polimorfos provenientes de distintos sistemas de recristalización o identificación de mezclas de polimorfos en un lote de producción. e) Estudios de cambios polimórficos y estabilizaci6ón de polimorfos en presencia de distintos materiales. f) Identificaci6n de compuestos que presentan isomería óptica (enantiómeros y mezclas racemicas). g) Identificaci6n y cuantificación de componentes de una mezcla. h) Identificación de cambios cristalinos que pueden presentarse con el principio activo o excipientes, durante la formación del producto sólido en operaciones tales como la granulación, la liofilización y la compresión, entre otros.

36 Calorimetría

37 Los análisis técnicos son únicos para proporcionar información de datos termodinámicos que permiten distinguir propiedades de los solidos puros o mezclas de ellos: el polimorfismo, el solvatomorfismo y las impurezas de los compuestos. Polimorfismo: Es la capacidad de un material sólido de existir en más de una forma o estructura cristalina. El polimorfismo se encuentra posiblemente en cualquier material cristalino incluyendo polímeros, minerales y metales. Solvatomorfismo: Los diferentes tipos de cristal son el resultado de hidratación o solvatación.

38 El efecto mas apreciable de la temperatura sobre la solubilidad, es el aumento de Ia misma, por un incremento de la temperatura; La cual obedece a que la entalpia de la disolución (∆HS) Suele ser en la mayoría de los casos endotérmica (signo positivo), de modo que se requiere Ia aportación de calor para disolver el compuesto. Cuando el proceso es exotérmico, se presenta el fenómeno opuesto (signo negativo).

39 PUNTO DE FUSIÓN. La presencia de impurezas tiene una influencia considerable sobre el punto de fusión. Según la ley de Raoult todo soluto produce un descenso crioscópico, o sea una disminución de la temperatura de fusión. Las impurezas actúan de soluto y disminuyen el punto de fusión de la sustancia principal disolvente. Si existe una cantidad importante de impureza, la mezcla puede presentar un amplio intervalo de temperatura en el que se observa la fusión

40 Así pues cabe indicar que:
a) Las sustancias sólidas puras tienen un punto de fusión constante y funden en un intervalo pequeño de temperaturas. b) La presencia de impurezas disminuye el punto de fusión y hace que la muestra funda en un intervalo grande de temperaturas. c) La presencia de humedad o de disolvente dará puntos de fusión incorrectos.

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42 La ecuación de Van't Hoff:
Con esta expresión de la variación de la solubilidad con la temperatura, aplicada a la disolución de compuestos en disolvente puros o en mezcla de disolventes, se pueden realizar estimaciones sobre las proporciones de mezcla y los cambios de temperatura necesarios para aumentar la solubilidad, así como estimar limites de variación de la temperatura en que se mantiene estable la disolución. En esta ecuación, el valor de Ia pendiente obtenida por regresión lineal de los datos, permite calcular la entalpia de disolución(∆HS)

43 Determinación De Impurezas Relacionadas con FENOTIAZINAS

44 EI método se basa en la separación física de las impurezas por cromatografía en capa delgada.
Soporte. Gel de sílice GF254 (CD08). Fase móvil A. Ciclohexano:dietilamina:acetona (80:10:10 v/v). Fase móvil B. Hexano:acetona:dietilamina (85:10:5 v/v). Fase móvil C. I-Butanol: solución de hidróxido de amonio 1 M (15:3 v/v). Disolvente. Metanol:dietilamina (95:5 v/v).

45 Procedimiento Aplicar por separado en una cromatoplaca
1 0 ᶣL de cada una de las preparaciones problema recientemente preparadas. Desarrollar el cromatograma, protegiendo de la luz, usando la fase móvil especificada en la monografía respectiva, dejando que el frente del disolvente ascienda 3/4 partes de la longitud de la cromatoplaca. Sacar la cromatoplaca, dejar secar al aire, y observar bajo la lámpara de luz UV.

46 Interpretación A menos que otra cosa se especifique, a excepción de la mancha principal y sin tomar en cuenta las manchas de la línea base, ninguna mancha obtenida en el cromatograma de la preparación de la muestra 1, es mas intensa que la mancha obtenida en el cromatograma de la preparación de la muestra 2. Cromatograma 1 Cromatograma 2

47 Prueba límite de impurezas alcalinas en aceites
En un tuba de ensayo mezclar 10 mL de acetona destilada recientemente y 0.3 mL de agua, agregar 0.05 mL de SI de azul de bromofenol al 0.04 % (m/v) en alcohol al 96 % y neutralizar la solución, si es necesario, con solución de acido clorhídrico 0.01 M o solución de hidróxido de sodio 0.01 M. Agregar 10 mL del aceite, agitar y dejar reposar. Se gastan cuanto mas 0.1 mL de soluci6n 0.01 M de acido clorhídrico para cambiar el color de la capa superior a amarillo.

48 DETERMINACION DE IMPUREZAS ORGANICAS VOLATILES
Para propósitos farmacopeicos, las impurezas orgánicas volátiles se refieren exclusivamente a los disolventes residuales de los procesos de obtención de fármacos y aditivos, o de los preparados farmacéuticos. Los disolventes residuales no se eliminan por completo mediante las técnicas de fabricación.

49 La selección adecuada del disolvente para la síntesis de un fármaco o un aditivo puede mejorar el rendimiento o determinar algunas características, como por ejemplo la forma cristalina, la pureza y la solubilidad. Por lo tanto, a veces el disolvente puede ser un elemento critico durante el proceso de síntesis u otra forma de obtención y purificación. Dado que los disolventes residuales no proporcionan ningún beneficio terapéutico, deben eliminarse en lo posible, para cumplir con las especificaciones del producto y de sus materias primas, así como con las buenas practicas de fabricación u otros requisitos basados en la calidad.

50 Los disolventes que se sabe que ocasionan toxicidad deberán evitarse en la producción de fármacos, aditivos o productos farmacéuticos, a menos que su uso pueda justificarse científicamente mediante una evaluación de riesgos y beneficios. Los disolventes asociados a toxicidades menos graves se deberán limitar para proteger a los pacientes de posibles efectos adversos.

51 EI IPCS International Programme on Chemical Safety, (www. who
EI IPCS International Programme on Chemical Safety, ( emplea el termino "ingesta diaria tolerable" (IDT) para describir los limites de exposición a sustancias químicas toxicas y la Organización Mundial de la Salud (OMS) y otras autoridades sanitarias nacionales e internacionales emplean el termino "ingesta diaria admisible" (IDA). El termino "exposicion diaria permitida“ (EDP) se define como la ingesta farmacéuticamente admisible de disolventes residuales para evitar confusiones con valores diferentes de IDA de una misma sustancia.

52 Clasificación de disolventes residuales.
ClASE 1 CLASE 2 CLASE 3 Disolventes residuales que deberán evitarse en la medida de lo posible: Sustancias carcinógenas conocidas para los seres humanos. Riesgos relacionados con el medio ambiente. Disolventes residuales que deben limitarse: Sustancias carcinógenas y no genotoxicas, o posibles agentes causantes de otras toxicidades irreversibles tales como neurotoxicidad o teratogenicidad en los animales. Disolventes que se piensa que son causantes de otras toxicidades significativas, pero reversibles. Disolventes con bajo potencial toxico para los seres humanos; no es necesario un limite de exposición basado en la salud. Los disolventes residuales de Clase 3 pueden tener una EDP de hasta 50 mg 0 mas por día.

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54 Los disolventes de clase 1 no deben ser empleados en la fabricación de fármacos, aditivos o preparados farmacéuticos debido a su toxicidad inaceptable o sus efectos en el deterioro ambiental. Sin embargo, si su uso es inevitable en función de fabricar un medicamento con un efecto terapéutico avanzado, entonces sus niveles deben ser restringidos.

55 El uso de los disolventes residuales de Clase 2 debe ser limitado en los fármacos, aditivos y preparados farmacéuticos debido a sus toxicidades inherentes.

56 IDENTIFICACION Y CONTROL DE DISOLVENTES RESIDUALES
Los métodos descritos en este Método General pueden ser usados para: 1. La identificación de la mayor parte de los disolventes residuales clase 1 y clase 2 en un fármaco, aditivo o preparado farmacéutico cuando los disolventes residuales son desconocidos. 2. Como prueba limite para los disolventes de clase 1 y clase 2 cuando están presentes en un fármaco, aditivo o preparado farmacéutico. 3. La valoración de los disolventes de Clase 2 cuando los limites son mayores de ppm (0.1 %) 0 para la valoración de los disolventes residuales de clase 3 cuando sea requerida.

57 Se describen dos sistemas cromatógrafos, pero se prefiere el Sistema A mientras que el Sistema B se emplea normalmente para confirmación de identidad. El sistema C se utiliza clínicamente para la determinación de oxido de etileno. La selección del procedimiento para la preparación de la muestra depende de la solubilidad de la sustancia que se va a analizar y en ciertos casos de los disolventes residuales que van a ser controlados. Cuando se emplea un procedimiento cuantitativo para el control de disolventes residuales debe ser validado.

58 Procedimiento: Analizar por cromatografía de gases con inyección de fase gaseosa, MGA 0241.
Sustancias de referencia: SRef de disolventes residuales Clase 1 y la Clase 2. Solución muestra (3): Esta preparación se emplea para control de N,N-dimetilacetamida y/o N,N-dimetilformamida cuando se sabe o se sospecha que una o ambas sustancias están presentes en la sustancia que se va a analizar. Disolver la sustancia que se va analizar en 1,3-dimetil-2-imidazolidinona (DMI) y diluir con el mismo disolvente. Solución muestra (1): Esta preparación se emplea para el control de disolventes residuales en sustancias solubles en agua. Disolver de la sustancia que se va a analizar en agua grado cromatógrafico y diluir con el mismo disolvente. Solución muestra (2): Esta preparación se emplea para el control de disolventes residuales en sustancias insolubles en agua. Disolver la sustancia a analizar en N,Ndimetilformamida (DMF) y diluir con el mismo disolvente.

59 Disolvente (a): SRef de disolventes residuales Clase 1, agregar sulfoxido de metilo y diluir a con agua. Diluir de esta solución con agua. Diluir de esta solución con agua. Disolvente (b): Disolver las cantidades apropiadas de la SRef de disolventes residuales de clase 2 en sulfoxido de dimetil y diluir con agua. Diluir hasta obtener una concentración ya establecida. Disolvente (c): Disolver en sulfoxido de dimetilo o en agua, si es adecuado; el disolvente o disolventes identificados y verificados en los sistemas A y B, Y diluir con agua, hasta obtener una concentración ya establecida.

60 Solución blanco: Preparar como se describe para disolvente (c) pero sin la adición del disolvente o disolventes (esta solución se utiliza para verificar la ausencia de picos interferentes). Solución de referencia (a) (clase 1): Transferir el disolvente (a) y el diluyente apropiado a un vial de inyección. Solución de prueba: Transferir la solución muestra y la solución blanco a un vial de inyección. Solución de referencia (c): Transferir la solución muestra y la solución disolvente (c) a un vial de inyección. Solución de referencia (a 1) (clase 1): Transferir la solución muestra y la solución disolvente (a) a un vial de inyección. Solución de referencia (b) (clase 2): Transferir la solución de disolvente (b) y el diluyente apropiado a un vial de inyección.

61 SISTEMA A Emplear una columna capilar de silice fundida de 30 m de longitud. El diámetro interno puede ser de 0.32 mm mm cubierto con un polimero con enlaces cruzados formado por 6 % de policianopropilfenilsiloxano y 94 % de polidimetilsiloxano. El gas acarreador es nitrógeno para cromatografía o helio para cromatografía a una velocidad lineal de 35 cm/s y una relación de partición de 1 :5. Usar un cromatógrafo con un detector de ionización de flama (puede usarse un espectrómetro de masas o un detector de captura de electrones para los disolventes residuales clorados de clase 1). Mantener la temperatura de la columna a 40°C durante 20 min, luego incrementarla a un intervalo de 10 °C/min hasta 240°C Y mantenerla durante 20 min. Mantener la temperatura del puerto de inyección a 140°C y la del detector a 250°C.

62 VERIFICACION DEL SISTEMA
Inyectar la solución de referencia (a), fase gaseosa en la columna descrita en el Sistema A y registrar el cromatograma Inyectar la solución de referencia (a), fase gaseosa en la columna descrita en el Sistema A y registrar el cromatograma. Inyectar la solución de referencia (b) fase gaseosa en la columna descrita en el Sistema A y registrar el cromatograma de manera que la resolución entre acetonitrilo y cloruro de metileno pueda ser determinada.

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65 PROCEDIMIENTO Inyectar la solución blanco y registrar el cromatograma.
Inyectar la solución de prueba fase gaseosa en la columna descrita en el sistema A. Si en el cromatograma obtenido no hay picos que correspondan a uno de los picos de disolventes residuales en los cromatogramas obtenidos con las soluciones de referencia ( a) o (b), entonces la sustancia analizada cumple con los requisitos de la prueba. Si cualquier pico obtenido en el cromatograma con la solución de prueba corresponde a cualquier pico de disolvente residual obtenido con las soluciones de referencia (a) o (b) se realiza el sistema b.

66 SISTEMA B Emplear una columna capilar de silice fundida de 30 m de longitud. El diámetro interno puede ser de 0.32 mm o 0.53 mm cubierta con macrogol (el espesor de la capa es de 0.25 /lm). EI gas acarreador es nitrógeno para cromatografía o helio para cromatografía a una velocidad lineal de alrededor de 35 cm/s y una relación de partición de 1 :5. Mantener la temperatura de la columna a 50°C durante 20 min, luego incrementarla a un intervalo de 6°C/min hasta 165°C y mantenerla durante 20 min. Mantener la temperatura del puerto de inyecci6n a 140°C Y la del detector a 250°C. Usar un detector de ionización de flama (puede usarse un espectrómetro de masas o un detector de captura de electrones para los disolventes residuales clorados, clase 1).

67 VERIFICACION DEL SISTEMA
Inyectar la solución de referencia (a), fase gaseosa en la columna descrita en el sistema B y registrar el cromatograma de manera que la señal-ruido para benceno pueda ser medida. La señal-ruido debe ser por lo menos 5. Inyectar la solución de referencia (a1) fase gaseosa en la columna descrita en el sistema B y registrar el cromatograma. Aun son detectables los picos debidos a disolventes residuales clase 1. Inyectar la solución de referencia (b) en la columna descrita en el Sistema B y registrar el cromatograma de manera que la resolución entre 1,1 ,2-tricloroeteno y acetonitrilo pueda ser determinada.

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70 PROCEDIMIENTO Inyectar la solución blanco y registrar el cromatograma. Inyectar la solución de prueba fase gaseosa en la columna descrita en el sistema B. Si en el cromatograma obtenido no hay picos que correspondan a los disolventes residuales de las soluciones de referencia (a) o (b), entonces la sustancia analizada cumple con los requisitos de la prueba.

71 CRITERIO DE ACEPTACION PARA DISOLVENTES CLASE 3.
En el caso de los disolventes clase 3, utilizar el MGA 0671, perdida par secada; el valor máximo permitido debe ser 0.5 %. EI procedimiento se usa para determinar en una muestra, la cantidad de materia volátil de cualquier naturaleza que se elimina bajo condiciones especificadas.

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73 SISTEMA C. OXIDO DE ETILENO
Esta prueba se aplica para la determinación de óxido de etileno en muestras solubles en agua o dimetilacetamida. Para sustancias que son insolubles o poco solubles en estos disolventes, la preparación de la solución muestra y las condiciones de la cámara gaseosa empleadas se indican en la monografía individual.

74 Análisis por cromatografía de fase gaseosa
A- Para muestras solubles en o miscibles con agua. Para muestras solubles o miscibles con dimetilacetamida.

75 A- Para muestras solubles en o miscibles con agua.
Preparación de la muestra. Pesar 1.00 g de la sustancia a analizar en un vial de 10 mL (pueden usarse otros tamaños dependiendo de las condiciones de operación) y agregar l.0 mL de agua. Cerrar y mezclar hasta obtener una solución homogénea. Dejar reposar a 70°C durante 45 min. Preparadon de referencia (a). Pesar l.00 g de la sustancia a analizar en un vial idéntico de 10 mL y agregar 0.50 mL de SR4 de óxido de etileno. Cerrar y mezclar hasta obtener una solución homogénea. Dejar reposar a 70°C durante 45 min. Preparación de referencia (b). Agregar 0.50 mL de SR4 de 6xido de etileno en un vial de 10 mL Y adicionar 0.1 mL de una solución recientemente preparada que contenga 10 mg/L de acetaldehído. Cerrar y mezclar hasta obtener una solución homogénea. Dejar reposar a 70°C durante 45 min.

76 Preparación de la muestra. Pesar 1
Preparación de la muestra. Pesar 1.00 g de la sustancia a analizar en un vial de 10 mL (puede usarse otros tamaños dependiendo de las condiciones de operación) y agregar 1.0 mL de dimetilacetamida y 0.20 mL de agua. Cerrar y mezclar hasta obtener una solución homogénea. Dejar reposar a 90°C durante 45 min. Preparación de referencia (a). Pesar 1.00 g de la sustancia a analizar en un vial idéntico de 10 mL, agregar 1.0 mL de dimetilacetamida y 0.10 mL de SR3 de óxido de etileno. Cerrar y mezclar hasta obtener una solución homogenea. Dejar reposar a 90°C durante 45 min. Preparación de referencia (b). Agregar 0.10 mL de SR3 de óxido de etileno en un vial de 10 mL y adicionar 0.1 mL de una solución recientemente preparada que contenga 10 mg/L de acetaldehído. Cerrar y mezclar hasta obtener una solución homogénea. Dejar reposar a 70°C durante 45 min.

77 Pueden usarse las siguientes condiciones para inyección de fase gaseosa estática:
Temperatura de equilibrio: 70°C (90°C para soluciones en dimetilacetamida) Tiempo de equilibrio: 45 min Temperatura de línea de transferencia: 75°C (150 °C para soluciones en dimetilacetamida) Gas acarreador: Helio para cromatografía Tiempo de presurizaci6n: 1 min Tiempo de inyecci6n: 12 s

78 El procedimiento cromatográfico se lleva acabo usando:
Una columna capilar de vidrio 0 cuarzo de 30 m de longitud y mm de diámetro interno, la superficie interior esta cubierta con una capa de 1.0 /µm de espesor de polidimetilsiloxano. EI gas acarreador es helio para cromatografía o nitrógeno para cromatografía con una velocidad lineal de alrededor de 20 cm/s y una relación de partición de 1:20. El detector es de ionización de flama.

79 Mantener la temperatura de la columna a 50°C durante 5 min, luego incrementarla a un intervalo de 5 °C/min hasta 180°C, posteriormente elevarla a un intervalo de 30 °C/min hasta 230°C, mantenerla así por 5 min; mantener la temperatura del puerto de inyección a 150°C y la del detector a 250°C. Inyectar un volumen adecuado, por ejemplo 1.0 mL de la solución de referencia (b) fase gaseosa. Ajustar la sensibilidad del sistema de manera que las alturas de los picos correspondientes al óxido de etileno y acetaldehído en el cromatograma obtenido, sean al menos 15 % de la escala total del registrador. La prueba no es valida a menos que la resolución entre los picos correspondientes a acetaldehído y óxido de etileno sea al menos 2. Inyectar por separado volúmenes adecuados, por ejemplo 1.0 mL (o el mismo volumen usado para la solución de referencia (b)), de las fases gaseosas de la solución de prueba y la solución de referencia (a). Repetir el procedimiento dos veces mas.

80 Verificación del sistema
Verificación del sistema. Para cada par de inyecciones, calcular la diferencia de área entre los picos obtenidos con la solución de prueba y la solución de referencia (a). La prueba es valida si el coeficiente de variación de tres valores obtenidos para óxido de etileno es menor del 15 %. Si las pesadas para la solución de prueba y la solución de referencia difieren en mas del 0.5 %, hacer las correcciones necesarias.

81 EI contenido de óxido de etileno en partes por millón se calcula mediante la siguiente formula: 𝐴𝑚 𝑋 𝐶 𝐴.𝑟𝑒𝑓 𝑎 𝑋 𝑃𝑚 −(𝐴𝑚 𝑋 𝑃.𝑟𝑒𝑓)

82 MGA 0551. PRUEBA LIMITE DE MERCURIO
Este método se basa en una reacción química entre el mercurio contenido como impureza en un medicamento dado, y una solución valorada de ditizona, formando ditizona de mercurio como producto de la reacción.

83 Recomendaciones especiales: Verificar que los disolventes y reactivos estén libres de impurezas metálicas. El ditizonato de mercurio es sensible a la luz, por 10 tanto, realizar la prueba protegiendo de la luz directa. Purificación de la ditizona. Disolver 1 g de ditizona en 50 a 75 mL de cloroformo, filtrar si es necesario, transferir a un embudo de separación y extraer con cuatro porciones de 100 mL de solución de hidróxido de amonio (1:99), descartar la fase clorofórmica y filtrar la capa acuosa a través de un pedazo de algodón insertado en la espiga del embudo, recibir en otro embudo de separación; acidificar ligeramente con solución de acido clorhídrico diluida y extraer la ditizona con dos o tres porciones de 20 mL de cloroformo. Combinar los extractos clorofórmicos en otro embudo de separación y lavarlos dos o tres veces con agua. Pasar el cloroformo a un vaso de precipitados adecuado, evaporar a sequedad en un baño de agua con calor suave y secar el residuo obtenido a 50°C durante 1 h en estufa de vacío. Mantener el reactivo purificado en la oscuridad en envases bien tapados.

84 Solución concentrada de ditizona
Solución concentrada de ditizona. Pesar exactamente 40 mg de ditizona previamente purificada, transferirlos a un matraz volumétrico de mL, disolver y llevar al aforo con cloroformo. Solución titulante de ditizona. Transferir 30 mL de la solución anterior a un matraz volumétrico de 100 mL, llevar al aforo con cloroformo y mezclar. Esta solución contiene mg/mL de ditizona. Solución concentrada de mercúrio. Transferir mg de cloruro mercúrico, exactamente pesados, a un matraz volumétrico de 100 mL, disolver y llevar al aforo con solución de acido sulfúrico 1 N. Esta solución contiene el equivalente a 100 mg de mercurio en 100 mL. Solución de mercurio para valorar la solución titulante de ditizona. Transferir 2 mL de la solución concentrada de mercurio a un matraz volumétrico de 100 mL, llevar al aforo con solución de acido sulfúrico 1 N y mezclar. Cada mililitro de esta solución contiene el equivalente a 20 µg de mercurio.

85 Las soluciones siguientes se utilizan para la determinación de la prueba limite de mercurio en las monografías de Fumarato ferroso y Sulfato ferroso. Solución de clorhidrato de hidroxilamina. Pesar 20 g de clorhidrato de hidroxilamina y transferirlos a un embudo de separación; agregar 65 mL de agua y cinco gotas de SI de azul de timol e hidróxido de amonio hasta que la solución tome color amarillo, agregar 10 mL de solución de dietilditiocarbamato de sodio a 14 %, mezclar y dejar reposar durante 5 min. Extraer la solución con porciones sucesivas de 10 mL a 15 mL de cloroformo, hasta que una porción de 5 mL del extracto cloroformico no tome color amarillo al agitarlo con SR de sulfato cúprico. Agregar solución de acido clorhídrico 3 N, hasta que la solución presente un color rosa. Si es necesario, agregar una o dos gotas mas de SI de azul de timol; transferir la solución a un matraz volumétrico de 100 mL llevar al aforo con agua y mezclar.

86 Solución de referencia de mercurio
Solución de referencia de mercurio. EI día de su uso, diluir cuantitativamente 1.0 mL de la solución concentrada de mercúrio con solución de acido sulfhídrico 1 N a mL; cada mililitro de esta solución contiene el equivalente a 1 µg de mercurio. Solución de extracción de ditizona. Disolver 30 mg de ditizona en mL de cloroformo, y agrega 5 mL de alcohol; conservar esta solución en refrigeración. Antes de su uso, agitar un volumen adecuado de esta solución con aproximadamente la mitad de su volumen de solución de acido nítrico al 1 %; descartar el acido nítrico. Solución diluída de extracción de ditizona. Justo antes de su uso, diluir 5 mL de la solución de extracción de ditizona con 25 mL de cloroformo.

87 Valoración de la solución titulante de ditizona. Transferir 1
Valoración de la solución titulante de ditizona. Transferir 1.0 mL de la solución de mercurio para valorar la solución titulante de ditizona a un embudo de separación de 250 mL, agregar 100 mL de solución de acido sulfúrico 1 N, 90 mL de agua, 1 mL de acido acético glacial y 10 mL de solución de clorhidrato de hidroxilamina (1:5). Valorar la solución con la solución titulante de ditizona, la cual se adiciona desde una microbureta de 10 mL, agitar la mezcla 20 veces después de cada adición, dejar separar la capa clorofórmica y descartarla. Continuar la titulación hasta que la adición final de la solución titulante de ditizona presente color verde después de la agitación.

88 Preparación de la muestra
Preparación de la muestra. Transferir 2 g de la muestra, exactamente pesados, a un matraz Erlenmeyer de 250 mL con tapón esmerilado, agregar 20 mL de una mezcla de acido nítrico: acido sulfúrico (1:1), adaptar a un condensador adecuado y calentar a reflujo la mezcla durante 1 h, enfriar y diluir con agua; calentar a ebullición hasta que no se perciban vapores de acido nitroso, enfriar la solución, diluir con agua cuidadosamente y transferir a un matraz volumétrico de 200 mL, llevar al aforo con agua, mezclar y filtrar. Procedimiento. Transferir 50 mL de la preparación de la muestra a un embudo de separación de 250 mL y extraer sucesivamente con pequeñas porciones de cloroformo, hasta que el ultimo extracto sea incoloro, descartar la fase orgánica y agregar a la preparación de la muestra extraída 50 mL de solución de acido sulfúrico 1 N, 90 mL de agua, 1 mL de acido acético glacial y 10 mL de solución de clorhidrato de hidroxilamina (1: 5) y proceder exactamente igual como se indica en el párrafo de Valoración de la solución titulante de ditizona a partir de "Valorar la solución".

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90 METALES PESADOS Esta prueba se utiliza para determinar el contenido de impurezas metálicas que son coloreadas por el ion sulfuro, bajo las condiciones aquí especificadas. La determinación se realiza por comparación visual de la muestra con un control preparado a partir de una solución estándar de plomo. El contenido de impurezas metálicas no deberá exceder el limite de metales pesados especificado en la monografía individual, en función del porcentaje (en peso) de plomo.

91 Las sustancias que generalmente responden a esta prueba son: plomo, mercurio, bismuto, arsénico, antimonio, estaño, cadmio, plata, cobre y molibdeno.

92 El Metodo I se emplea para sustancias que dan preparaciones transparentes e incoloras bajo las condiciones especificas de la prueba. En caso de no indicar otra cosa en la monografia individual, utilizar el metodo I. * En el método 2 no se recupera mercurio.