Observación de vectores. Estudios Parasitológicos

Presentación del tema: "Observación de vectores. Estudios Parasitológicos"— Transcripción de la presentación:

1 Observación de vectores. Estudios Parasitológicos
Trabajo Práctico 2012 Observación de vectores. Estudios Parasitológicos Floridia Ricardo Ariel

2 Estudios Parasitológicos

3 Sensibilidad de métodos
El laboratorio en el diagnóstico de la infección chagásica Dra. Beatriz Basso

4 Búsqueda de Tripanosoma cruzi en insecto vector
Identificar si se trata de un insecto de la subfamilia Triatominae (posible transmisor de la enfermedad de Chagas – Mazza Tomar el insecto con la pinza

5 Búsqueda de Tripanosoma cruzi en insecto vector
Liberar el contenido intestinal. Con dos pinzas Precauciones. Guardapolvo, guantes, gafas y vidrio protector. Observar al microscopio a 40x

6 Búsqueda de Tripanosoma cruzi en insecto vector

7 Xenodiagnóstico Considerado el método de referencia
Sensibilidad: En formas agudas entre 85 al 100%, en las congénitas 80% y en las crónicas entre el 20 al 50%. Las cajas están compuestas por ninfas de 3o a 4o estadio, con algunas semanas de ayuno (2 a 3) y ávidas de alimentarse. Se colocan alrededor de 10 a 12 ninfas dentro de una caja, con una boca libre, cubierta con gasa; se utilizan 4 de estas cajas sobre la piel de los antebrazos.

8 Xenodiagnóstico Observar contenido intestinal a los 30, 60 y 90 días de la succión de sangre. Se busca tripomastigotes o epimastigotes en el contenido intestinal.

9 Método Strout Es el método de preferencia en la etapa aguda (hasta los 40 – 60 días post infección). Reconocer la movilidad de los parásitos entre los hematíes Se debe repetir en forma seriada (3 veces) También se utiliza para control de tratamiento. Para informar un Strout como positivo debemos observar la movilidad del parásito. IMPORTANTE: observar recorriendo todos los campos (no menos de 45 minutos) y varios preparados

10 Suero Coag. 5-10 mL Sedimento Tº amb Sensibilidad 95% 600 rpm 2 min.
Objetivos de 10x y 40x (45 minutos) Sensibilidad 95%

11 Medicina Vol 59 Supl III – 1999 De Rissio, AM; Maidana,CG; Martín García, MC y Ruiz, AM INP”Dr. Mario Fatala Chabén”  Micrométodo de Strout Se utiliza un tubo Eppendorf de 1,5 ml de capacidad al que se le agrega una gota de heparina más 0,5 ml de sangre venosa, se mezcla por inversión Centrifugar durante dos minutos a 3000 rpm. Tomar una gota de la interfase, rica en glóbulos blancos, y se observa entre porta y cubreobjeto al microscopio con 400 aumentos. Deben observarse como mínimo 4 preparados. Sensibilidad similar al Strout Reducción de cantidad de sangre a extraer.

12 J Clin Microbiol. 1983 August; 18(2): 327-330
H Feilij, L Muller and S M Gonzalez Cappa Microhematocrito Para diagnóstico durante la etapa aguda o en los casos congénitos. Es importante extraer 6 o mas tubos capilares (50 ul c/u) Sensibilidad semejante a strout Observar varios preparados con las consideraciones del strout Inconvenientes técnicos. Bioseguridad

13 BIOSEGURIDAD Cortar Sensibilidad 90 a 95%
Cerrar extremo con plastilina BIOSEGURIDAD Cortar 6 a 9 microhematocrito heparinizado 45 segundos a 5000 rpm Objetivos de 10x y 40x (45 minutos) Sensibilidad 90 a 95%

14 Gota fresca Método que se puede efectuar en la etapa aguda
De fácil realización De baja sensibilidad Observar movilidad de los parásitos.

15 Sensibilidad 50% 100x / 400x 45 minutos Tripanosoma cruzi
Aumentar irrigación gota de citrato al 2%) 100x / 400x 45 minutos Tripanosoma cruzi Sensibilidad 50%

16 Gota gruesa Método sencillo Baja sensibilidad
Observar morfología del parásito

17 Sensibilidad 50% Colorear con Giemsa diluido (1/20) 30 minutos.
Lavar y secar 1-2min Dejar secar Desfibrinar Colocar 1 a 3 gotas objetivo de 100x aceite Tripanosoma cruzi Sensibilidad 50%

18 Hemocultivo Consiste en sembrar una muestra de sangre en un medio de cultivo artificial y amplificar el número de parásitos. Como producto del cultivo se obtienen epimatigotes de T. cruzi. Es aplicable a la etapa aguda pero también en la crónica, en la cual disminuye en gran medida la sensibilidad. Requiere de un tiempo prolongado para obtener resultados. Se puede realizar una coloración (Giemsa) para visualizar el tripanosoma con mayor definición.

19 Sensibilidad: Agudo: 80 – 100% Crónico:40 – 60%
Se incuba sangre heparinizada a 28ºC hasta 60 días Sensibilidad: Agudo: 80 – 100% Crónico:40 – 60%

20 PCR para Chagas No está validad (solo para seguimiento de tratamiento)
Tiene elevada sensibilidad (aún en etapa crónica) Falsos positivos y algunos falsos negativos. Selectivo para T. cruzi y T. rangeli Amplifica un fragmento de 330 pb del ADN k Mix p/1x30: 30ul H2O: ,7 ul Buffer (10x) Taq: 3 ul MgCl2 (25mM): 3,6 ul dNTPs (5mM): 1,5 ul Primer 121 (50pmol/ml): 1,5 ul Primer 122 (50pmol/ml): 1,5 ul Taq (0,8ul/20ul): 1,2 ul TOTAL: 25 ul (1x25ul)   25ul mix + 5 ul (muestra)

21 PCR para Chagas

22 Bibliografía Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de la Trypanosomiosis americana (enfermedad de Chagas). Serie de Normas Técnicas Nº 00. Lima, 2005 Fortalecimiento en la Enseñanza de la Enfermedad de Chagas Diagnóstico de Laboratorio Dra. Beatriz Basso* * Profesora, Servicio de Neonatologia, Cátedra de Pediatría y Neonatología. Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Córdoba Universidad Nacional de Córdoba Parasitosis regionales. Un estudio referido a las principales parasitosis de Bahía Blanca, Provincia de Buenos Aires, Argentina. Sixto Raúl Costamagna, Elena C. Visciarelli. Parasitosis Humanas. David Botero Marcos Restrepo. Tercera edición La enfermedad de Chagas. A la puerta de los 100 años del conocimiento de una endemia americana ancestral. Manual Práctico de Parasitología Médica. Dra. Nélida G. Saredi Clave pictórica de triatóminos (Hemiptera: Triatominae) de Venezuela. Ana Soto-Vivas. Boletín de Malariología y Salud Ambiental. Vol. XLIX, Nº 2, Agosto-Diciembre, 2009 Aspectos exocoriales de huevos de Triatoma patagonica Del Ponte, 1929 por microscopía electrónica de barrido Elena VisciarelliI; Adriana FerreroII; Sixto Raúl CostamagnaI. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional del Sur, San Juan 670, 8000 Bahía Blanca, Prov. de Buenos Aires, Argentina. ICátedra de Parasitología Clínica. IICátedra de Zoología de Invertebrados II Las especies de Triatominae de mayor adaptación al hombre, tratadas en este trabajo. Hipotesis sobre el desarrollo de la Trypanosomiasis Americana - Carpintero, D. J. y Viana, E.J. Buenos Aires, Argentina Alimentación y defecación en triatominos del género Rhodnius (Hemiptera: Reduviidae) alimentados con sangre humana. E. Aldana     E.Lizano     M.Rodríguez     A. Valderrama. Recibido  28-IV-2000.  Corregido  20-XI-2000.  Aceptado   20-XI-2000  Ecología de la enfermedad de Chagas, y su prevención y control en la Amazonia. Un enfoque de ecosalud. Roberto Bazzani, IDRC/CRDI; Roberto Salvatella, OPS/OMS La aerotermia como alternativa para el control de Triatoma infestans (Hemiptera, Reduviidae) resistentes a deltametrina. Alberto G. GentileI; José L. SartiniII; María C. CamposIII; Juan F. SánchezIV. ICoordinación de Gestión Epidemiológica, Ministerio de Salud Pública, Salta, Argentina Diagnóstico Molecular de la enfermedad de Chagas. Constança Britto. Laboratorio de Biología Molecular y Enfermedades Endémicas, Instituto Oswaldo Cruz, Fiocruz, , Río de Janeiro, RJ, Brasil. Correo electrónico: Utilidad de la técnica de PCR. en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Brusés, Bettina L. - Lucero, Horacio - Gorodner, Jorge O. Departamento de Biología Molecular - Instituto de Medicina Regional - UNNE.