CLASE DE DISCUSIÓN: Stem Cells

Presentación del tema: "CLASE DE DISCUSIÓN: Stem Cells"— Transcripción de la presentación:

1 CLASE DE DISCUSIÓN: Stem Cells
“Effect of transplanted mesenchymal stem cells from rats of different ages on the improvement of Heart function alter acute myocardial infarction” Wang y cols, Chin Med J 2008; 121(22):

2 1) Ventajas y desventajas del transplante de stem cells mesenquimales (MSCs) en tejido cardíaco.
Ventaja: Mejora la función cardíaca por estimulación de la angiogénesis del área infartada. Desventaja: La mejoría de la función es limitada por apoptosis de las MSCs trasplantadas.

3 2) Antecedentes sobre el uso de MSCs provenientes de ratones de distinta edad. Justificar.
Las stem cells del colon de ratas jóvenes tienen mayor capacidad anti-apoptótica que las de ratas adultas.

4 3) ¿Cuál es el objetivo del estudio?
Investigar si las MSCs de ratas jóvenes trasplantadas a las áreas infartadas tienen mayor capacidad anti-apoptótica, mejorando la función cardíaca a través de la angiogénesis y disminuyendo la apoptosis de los cardiomiocitos.

5 4) ¿Cúales fueron los tres grupos de ratones utilizados?
Grupo control: ratas con IAM e inyección de solución fisiológica. Grupo de MSCs de ratas adultas: ratas con IAM e inyección de MSCs de ratas adultas. Grupo de MSCs de ratas jóvenes: ratas con IAM e inyección de MSCs de ratas jóvenes.

6 5) ¿Cómo recrearon un infarto agudo de miocardio en los ratones
5) ¿Cómo recrearon un infarto agudo de miocardio en los ratones? ¿Cómo lo detectaron? Ligaron la arteria coronaria descendente anterior izquierda. Lo detectaron mediante el patrón de IAM (Q patológica en las derivaciones V1 a V6) en el ECG.

7 6) Analice los resultados de la citometría de flujo de las MSCs.
Las MSCs fueron: Negativas para CD11 y CD34 Positivas para CD44 y CD90 En conclusión, las MSCs a trasplantar eran predominantemente de estirpe mesenquimal y no hematopoyéticas.

8 7) ¿Por qué las MSCs fueron teñidas con DAPI?
Las células fijas o inmobilizadas se tiñen con el colorante nuclear DAPI de color azul. Las MSCs fueron teñidas previo a ser trasplantadas para determinar, posteriormente, su presencia y localización en el miocardio.

9 Significa que sufrieron un proceso de diferenciación cardiomiogénica.
8) Qué significa que las MSCs transplantadas sean troponina (cTnT) positivas? Significa que sufrieron un proceso de diferenciación cardiomiogénica.

10 La apoptosis en las MSCs fue detectada mediante tinción de Hoechst.
9) ¿Mediante qué técnicas detectaron apoptosis en las MSCs y en los cardiomiocitos? ¿Qué característica permiten evaluar? La apoptosis en las MSCs fue detectada mediante tinción de Hoechst. La apoptosis en los cardiomiocitos fue detectada mediante la técnica de TUNEL y análisis inmunohistoquímico para caspasa 3 activada.

11 10) ¿Cuáles fueron los resultados de estos estudios?
Se determinó la apoptosis de las MSCs in vitro luego de 24 horas de isquemia y anoxia. La tasa de apoptosis fue mayor para el grupo de las MSCs de ratas adultas. La apoptosis de los cardiomiocitos y la marcación de caspasa 3 activada fue menor en el grupo de las MSCs de ratas jóvenes.

12 Análisis inmunohistoquímico y RT-PCR para VEGF.
11) ¿Qué técnicas utilizaron para determinar el aumento de la angiogénesis? Análisis inmunohistoquímico y RT-PCR para VEGF. Análisis Inmunohistoquímico para las células endoteliales (factor VIII). Análisis al MO para el conteo de vasos sanguíneos.

13 12) ¿Cuáles fueron los resultados?
Se detectó mayor expresión del ARNm de VEGF en el grupo de las MSCs de ratas jóvenes. La densidad de nuevos vasos sanguíneos fue mayor en el grupo de las MSCs de ratas jóvenes.

14 13) ¿Qué efectos tuvo el transplante de MSCs sobre la función y el tamaño cardíaco?
La función cardíaca mejoró en los 3 grupos, pero la mejoría más marcada se observó en el grupo de las MSCs de ratas jóvenes. El trasplante de las MSCs disminuyó el tamaño cardíaco, pero no hubo una diferencia significativa entre los 3 grupos.

15 14) ¿Qué razones plantean los autores para explicar el mayor aumento de la angiogénesis producido por el transplante de MSCs de ratones jóvenes? Las MSCs de ratas jóvenes secretan un gran número de citoquinas además del VEGF. VEGF mejora la función cardíaca porque: induce angiogénesis que mejora el flujo de sangre al tejido isquémico y reduce el área infartada al impedir la apoptosis de los cardiomiocitos e inhibir a proteínas conectivas que forman el tejido de cicatrización. Las MSCs de ratas jóvenes sobreviven más tiempo en situaciones de anoxia e isquemia, por lo tanto incrementando aún más la angiogénesis.

16 15) Al comparar el transplante celular vs
15) Al comparar el transplante celular vs. factores de crecimiento ¿Por qué dice que el primero puede controlarse fisiológicamente? La células trasplantadas secretan factores de crecimiento al tejido infartado en dosis y frecuencias más cercanas a las fisiológicas. Las células persisten más tiempo en el tejido. Los factores se degradan más rápidamente. Las células pueden dividirse y dar origen a más células que secreten más factores de crecimiento.

17 16) ¿Cuáles son los puntos aún no determinados con respecto al transplante de MSCs en corazón?
La cantidad de MSCs a trasplantar, El tiempo óptimo para realizar el trasplante, y El sitio del trasplante.