Corynebacterium diphtheriae

Presentación del tema: "Corynebacterium diphtheriae"— Transcripción de la presentación:

1 Corynebacterium diphtheriae

2 Ubicación taxonómica. Grupo: Bacilos Gram-positivos irregulares, no esporulados. Comprende 37 géneros, incluidos Gardnerella

3 Género Corynebacterium.
Está compuesto de 46 especies, principalmente parásitos obligados de las membranas mucosas y de la piel de los mamíferos, pero ocasionalmente pueden aislarse de otras fuentes. 31 de estas especies son de importancia médica, de las cuales, 18 se han reportado a partir de 1995.

4 El género Corynebacterium: bacilos Gram-positivos ligeramente curvos y con forma de garrote, no esporulados, no ácido-alcohol resistentes, aerobios o anaerobios facultativos. Incluye especies oportunistas y patógenas para humanos.

5 Usualmente se forman dentro de las células gránulos metacromáticos de polimetafosfato.
Son inmóviles, no esporulados, y no ácido-resistentes.

6 El término difteroide se ha usado en bacteriología médica para las bacterias corineformes, ésto es, los bacilos pleomórficos Gram-positivos que se tiñen irregularmente

7 Tienen en común con las especies del género Corynebacterium el hecho de ser aerobios o anaerobios facultativos, inmóviles, catalasa positivos, no esporulados y no ácido-alcohol resistentes, con poca tendencia a la ramificación y pueden tener gránulos metacromáticos (polifosfatos).

8 Las células pueden disponerse en palizada y en forma de V, semejando configuraciones cuneiformes.

9 Tinción de Gram de Corynebacterium sp
Tinción de Gram de Corynebacterium sp., teñidos intensamente, algunas formas en V y algunas empalizadas.

10 Tinción de Gram de difteroides
Tinción de Gram de difteroides. El término difteroides incluye varias especies de Corynebacterium, que son comensales de piel. Esta tinción muestra una típica disposición de los bacilos en “letras chinas”.

11 Frote de un cultivo de bacilo diftérico con tinción de Gram
Frote de un cultivo de bacilo diftérico con tinción de Gram. La forma en cachiporra, su organización en forma de “letras chinas” y la ligera curvatura de los bacilos son caracteres típicos de las corinebacterias.

12 Tinción con azul de metileno que representa bacilos con gránulos metacromáticos, característicos de especies de Corynebacterium.

13 Tinción con azul de metileno preparada con colonias crecidas en el medio de Loeffler, que ilustra la disposición difteroide de los bacilos, con gránulos metacromáticos, característicos de C. diphtheriae.

14 Tinción con azul de metileno preparada con colonias crecidas en el medio de Loeffler, que ilustra la disposición difteroide de los bacilos, con gránulos metacromáticos, característicos de C. diphtheriae.

15 Características fisiológicas.
Son anaerobios facultativos, comúnmente requieren medios nutrimentalmente ricos, como los que tienen sangre o suero, en los cuales forman colonias usualmente convexas y semi-opacas, con una superficie mate.

16 Son catalasa positivos, a menudo reducen los nitratos y el telurito.
Raramente acidifican la lactosa y la rafinosa, o licuan la gelatina.

17 Corynebacterium diphtheriae.

18 Hábitat natural. Muchas especies de corinebacterias son parte de la flora normal de la piel y de las membranas mucosas de los humanos y otros mamíferos. El hábitat de una minoría de las especies (p. ej. C. callunae y C. ammoniagenes) es el medio ambiente.

19 C. diphtheriae puede aislarse de la nasofaringe así como de lesiones en la piel, las cuales realmente representan un reservorio para la diseminación de la difteria.

20 Hábitat natural e importancia médica.
Las corinebacterias de importancia médica principalmente están restringidas a humanos y animales, y son C. diphtheriae, "

21 Corynebacterium diphtheriae
Puede encontrarse tanto en personas enfermas como en la garganta de personas portadoras sanas. Las úlceras diftéricas en piel son una fuente importante de infección en países en desarrollo.

22 Aunque las manifestaciones clínicas de la difteria son causadas por cepas productoras de toxina, las bacterias no toxigénicas también pueden causar síntomas locales como dolor de garganta y aumento del tamaño de las amígdalas; en el mismo paciente pueden aislarse cepas productoras y no productoras de toxina.

23 En la difteria, la toxina sintetizada en la lesión local es absorbida y transportada por la sangre a todas las partes del cuerpo, pero los efectos tóxicos involucran principalmente al corazón y a los nervios periféricos.

24 La puerta usual de entrada para C
La puerta usual de entrada para C. diphtheriae es el tracto respiratorio superior, donde el organismo se multiplica en las capas superficiales de las membranas mucosas. Ahí elabora su exotoxina, la cual causa necrosis de los tejidos vecinos.

25 La respuesta inflamatoria resulta en la formación de la pseudomembrana diftérica compuesta de bacterias, epitelio necrótico, fagocitos y fibrina. La membrana usualmente aparece primero en las amígdalas o en la faringe posterior, y puede extenderse hacia arriba hasta los paladares duro y blando, o hacia abajo hasta la laringe y la tráquea.

26 La difteria cutánea es común en áreas tropicales
La difteria cutánea es común en áreas tropicales. Su significado epidemiológico principal puede ser su papel como reservorio de C. diphtheriae y como un potenciador de su distribución durante las epidemias. También ocurren lesiones diftéricas en las narinas, interior de la nariz, boca, ojos, oído medio y, en casos raros, en la vagina.

27 Difteria.

28 La difteria es una enfermedad del tracto respiratorio superior que se caracteriza por dolor de garganta, disfagia, linfadenitis, fiebre de baja intensidad, malestar general, y dolor de cabeza. Es característica la presencia de una membrana nasofaríngea adherente, la cual ocasionalmente puede causar obstrucción.

29 Fotografías de la cavidad oral que ilustran el enrojecimiento agudo de la mucosa con formación focal de una membrana fibrinosa característica de la difteria.

30 Fotografía de la cavidad oral que ilustra el enrojecimiento agudo de la mucosa con formación focal de una membrana fibrinosa característica de la difteria.

31 Los efectos sistémicos graves de la difteria incluyen miocarditis, neuritis, y daño renal causado por la exotoxina de C. diphtheriae, la cual es codificada por un bacteriófago que posee el gene tox. C. diphtheriae también puede causar difteria cutánea o endocarditis.

32 La patogénesis de C. diphtheriae es compleja
La patogénesis de C. diphtheriae es compleja. La formación de toxina puede incrementar la gravedad de una infección, pero no es necesaria ni suficiente para la supervivencia ni para la patogenicidad del bacilo.

33 Mecanismos fisiopatogénicos.
Otros factores. La invasividad en C. diphtheriae está asociada con la producción de dicorinemicolato de trealosa (factor cuerda o factor cordón), el cual puede inactivar la mitocondria en células de mamíferos. El material purificado produce letalidad en ratón, inhibición de la migración de LPMN, inducción de la formación de granulomas, etc.

34 El factor de diseminación (sustancia B o hialuronidasa) contribuye al edema local, a la necrosis y a la hemorragia. Es producido por casi todas las cepas de C. diphtheriae aisladas de infecciones clínicas, y puede ser de importancia en la producción de difteria “hipertóxica”, y de la difteria que se presenta en las personas inmunizadas.

35 Diagnóstico de Laboratorio.

36 Recolección y transporte de las muestras.
En general, las bacterias corineformes no necesitan manejos especiales cuando se recolectan las muestras.

37 El diagnóstico de difteria es principalmente clínico
El diagnóstico de difteria es principalmente clínico. El médico debe notificar de inmediato al laboratorio de que se sospecha difteria. En caso de difteria respiratoria, el material para cultivo deberá de obtenerse con un hisopo (ya sea de algodón o de poliéster) de las áreas inflamadas de la nasofaringe.

38 Tanto en pacientes como en contactos, los cultivos deberán ser tomados de la nasofaringe y de la orofaringe, ya que el 20% de los cultivos positivos pueden perderse cuando sólo se cultiva uno de estos sitios. Los cultivos de la nasofaringe deberán tomarse con un alambre flexible de alginato de calcio, que alcance las partes profundas de las coanas.

39 En pacientes asintomáticos deberán muestrearse las fosas amigdalinas, la faringe posterior y las áreas retrouvulares. Antes de cultivar heridas, las lesiones deberán limpiarse con solución salina estéril, y deberá eliminarse cualquier costra. Luego se aplicará firmemente un hisopo de algodón a la base de la herida.

40 Es preferible que los hisopos sean transportados inmediatamente al laboratorio de microbiología para cultivarse. Si deben enviarse al laboratorio, los medios de transporte semisólidos (p. ej. el Amies) aseguran la supervivencia de la bacteria.

41 Todas las bacterias corineformes son relativamente resistentes a las desecación y a los cambios moderados de temperatura. El material de pacientes sospechosos de difteria de heridas puede obtenerse con hisopo o por aspiración.

42 Si los hisopos no se van a sembrar en un lapso de 24 h, se recomienda usar un medio de transporte como el Amies o el Stuart. Si va a pasar mucho tiempo puede emplearse un medio líquido con telurito de potasio, fosfomicina y nistatina para disminuir la contaminación.

43 Examen directo. No debe intentarse el diagnóstico de difteria con base en el examen microscópico de un frote directo, pues pueden ocurrir tanto falsas positivas como falsas negativas.

44 Después de que se han inoculado los medios apropiados, los hisopos tomados de las membranas diftéricas pueden usarse para preparar frotes para tinción con el método de Neisser o de azul de metileno de Loeffler.

45 En el Centers for Disease Control and Prevention (CDC) se ha descrito una prueba para la detección directa de la toxina diftérica por medio de PCR. Este sistema tiene la mayor sensibilidad cuando se emplean hisopos de poliéster de Dacrón y cuando los medios de transporte se conservan a 4EC.

46 Aislamiento e incubación.
Las bacterias corineformes, incluyendo C. diphtheriae pueden aislarse fácilmente en un medio de agar sangre selectivo que contenga 100 µg de fosfomicina por ml. También es posible depositar discos que contengan 50 µg de fosfomicina (Becton-Dickinson BBL, Cockeysville , Md.) sobre una caja de agar sangre, y luego examinar las colonias que crezcan alrededor del disco. Las bacterias corineformes no crecen en agar MacConkey.

47 Los medios primarios para cultivar C
Los medios primarios para cultivar C. diphtheriae deben ser agar sangre más un medio selectivo (agar sangre cistina telurito [ASCT] o el medio de Tinsdale).

48 Las cajas deberán revisarse después de 18 a 24 horas de incubación a 37EC, de preferencia en una atmósfera rica en 5% de CO2. El telurito inhibe el crecimiento de muchas bacterias no corineformes, pero unas cuantas cepas de C. diphtheriae son sensibles al telurito de potasio y por consiguiente no crecerán en ASCT, pero sí en agar sangre.

49 Debe hacerse notar que el crecimiento en ASCT y la reducción del telurito no son específicos de C. diphtheriae, puesto que muchos otros corineformes también pueden producir colonias negras (aunque más pequeñas).

50 El mejor medio para el cultivo directo de C
El mejor medio para el cultivo directo de C. diphtheriae es probablemente el medio de Tinsdale, recomendado por el Laboratorio de Referencia en Difteria de la O.M.S. (Public Health Laboratory Service, London, United Kingdom). Las limitaciones del medio de Tinsdale son su vida de almacenaje relativamente corta (< de 4 semanas) y la necesidad de añadirle suero de caballo.

51 En el medio de Tinsdale pueden observarse tanto la actividad de telurito reductasa (por la aparición de colonias negras) como la de cistinasa (aparición de un halo café alrededor de las colonias). Si no se dispone ni de ASCT ni del medio de Tinsdale, se recomienda utilizar cajas de agar sangre con colistina y ácido nalidíxico (CAN).

52 Corynebacterium diphtheriae se divide comúnmente en cuatro biotipos: gravis, mitis, belfanti e intermedius. Inicialmente éstos biotipos fueron definidos por diferencias en su morfología colonial y en sus reacciones bioquímicas.

53 Otros biotipos de C. diphtheriae producen colonias más grandes (hasta de 2 mm después de 24 horas) blancas u opacas, indistinguibles una de otra. El biotipo lipofílico intermedius se presenta sólo raramente en infecciones clínicas, y las cepas del biotipo belfanti casi nunca albergan el gen de la toxina diftérica.

54 Medio de Loeffler. Se utiliza principalmente para el aislamiento de C. diphtheriae de muestras clínicas. Por su contenido de suero también se emplea en forma más general para determinar la actividad proteolítica de diversos microorganismos. Agregue 3 volúmenes de suero de bovino o de equino a un volumen de infusión de glucosa (glucosa al 1%). Fraccione en tubos con tapón de rosca y coagule y esterilice en posición inclinada.

55 Suero de Loeffler (comercial).
Suero de bovino partes Caldo dextrosa parte

56 Disuelva 80 g en un litro de agua destilada entibiada a 42- 45ºC
Distribuya en tubos con tapón de rosca y deposítelos en el autoclave en posición inclinada Coagule el medio como sigue: Cierre flojamente la válvula del autoclave, enciéndalo hasta que empiece a salir vapor y mantenga el flujo por 10 minutos, Esterilice el medio como sigue: cierre la válvula del autoclave fuertemente, esterilice a 15 lb durante 15 minutos Apague el autoclave y deje que la presión caiga a cero antes de sacar los tubos

57 Medio de Pai. Huevo homogeneizado .......... 1,000 ml
Glicerol estéril ml Agua destilada estéril ml Se baten los huevos y se les añade el agua destilada. La suspensión se filtra a través de dos capas de gasa estéril, se agrega el glicerol en condiciones de esterilidad y se mezcla bien. El medio se distribuye en tubos estériles con tapón de rosca y se coagula y esteriliza en forma similar al medio de L-J.

58 Agar sangre-cistina-telurito.
Es un medio utilizado para el aislamiento primario de C. diphteriae. El telurito de potasio del medio sirve para inhibir el desarrollo de muchas especies bacterianas de la flora normal del tracto respiratorio superior, incluyendo muchas especies de Streptococcus y de Staphylococcus. C. diphteriae se desarrolla bien, produciendo colonias grises o negras después de h de incubación.

59 Agar infusión de corazón.
Infusión de corazón de bovino g Triptosa g Cloruro de sodio g Agar g Componentes del agar sangre-cistina-telurito Agar infusión de corazón al 2% … ml Telurito de potasio al 0.3% ml L-cistina mg Sangre de carnero ml

60 Suspenda 2. 0 g del polvo de agar infusión de
Suspenda 2.0 g del polvo de agar infusión de corazón en 100 ml de agua destilada y caliente a ebullición hasta su disolución completa Esterilice en autoclave a 121ºC durante 15 minutos Enfríe a 45-50ºC y en forma aséptica añada la solución de telurito de potasio, previamente esterilizada por filtración Añada la sangre desfibrinada estéril Añada la cistina en polvo Mezcle bien y vacíe en cajas de Petri estériles