De DNA a proteína.

Presentación del tema: "De DNA a proteína."— Transcripción de la presentación:

1 De DNA a proteína

2 Los genes se expresan con diferente eficiencia

3 El mecanismo de transcripción

4 Diferentes clases de ARN´s

5 Transcripción en bacterias

6 Initiation Elongation Termination
The promoter functions as a recognition site for transcription factors The transcription factors enable RNA polymerase to bind to the promoter forming a closed promoter complex Following binding, the DNA is denatured into a bubble known as the open promoter complex, or simply an open complex Elongation RNA polymerase slides along the DNA in an open complex to synthesize the RNA transcript Termination A termination signal is reached that causes RNA polymerase to dissociated from the DNA

7 La cadena codificante tiene la misma secuencia
que el transcrito

8 Carácterísticas del promotor

9 Los promotores tienen orientación

10 La dirección de la transcripción de los genes
puede variar en el cromosoma

11 La ARN polimerasa holoenzima es la encargada de copiar el ADN

12 Factores sigma (s)

13 Existen diferentes estados en la iniciación

14 Elongación de la cadena

15 URNA-ADNA apareamiento es débil La RNA polimerasa se detiene
Terminación de la transcripción terminadores intrínsecos NusA URNA-ADNA apareamiento es débil No se necesita una proteína para remover físicamente a la RNA polimerasa del DNA La RNA polimerasa se detiene

16 La proteína Rho es una helicasa
Terminadores dependientes de Rho rho utilization site La proteína Rho es una helicasa sitios rut Note: This is an intrastrand RNA:RNA interaction (folding stabilized by H-bonding of A-U and C-G)

17 Mensajes policistrónicos

18 Estructura de los mRNA

19 Transcripción en eucariontes

20 ARN polimerasas Structure of a bacterial RNA polymerase
Structure of a eukaryotic RNA polymerase II

21 Diferentes tipos de ARN polimerasas

22 Generalmente una adenina
Los promotores eucariontes también tienen sitios consenso Generalmente una adenina El núcleo del promotor es relativamente corto consiste de la caja TATA, quién es importante para determinar el sitio preciso del inicio de la transcripción El núcleo del promotor por sí mismo produce una transcripción de bajo nivel conocida como transcripción basal

23 Transcripción basal (factores de transcripción)

24 TFIIH plays a major role in the formation of the open complex
A close complex TFIIH plays a major role in the formation of the open complex It has several subunits that perform different functions One subunit hydrolyzes ATP and phosphorylates a domain in RNA pol II known as the carboxyl terminal domain (CTD) This releases the contact between TFIIB and RNA pol II Other subunits act as helicases Promote the formation of the open complex Released after the open complex is formed RNA pol II can now proceed to the elongation stage

25 Factores de transcripción

26 Proteínas activadoras de la transcripción

27 Procesamiento del ARN

28 Adición del CAP La fosfatasa remueve un fosfato del 5´
2) Una guanil transferasa agrega GMP 3) Una metil transferasa agrega un grupo metilo

29 Identificación experimental de los intrones
Asa de RNA que se desplaza El mRNA no hibrida en esta región debido a la secuencia del intron

30 Vista al microscopio electrónico
La hibridización causa la formación de dos asas R, separadas por una región de doble cadena

31 Se puede deducir el número
de intrones

32 Tipos de intrones

33 Intrones del grupo I y II (autocatálisis)

34 Genes estructurales En eucariontes, la transcripción de genes estructurales produce un transcrito largo conocido como pre-mRNA ó RNA heterogéneo nuclear (hnRNA) Este RNA es alterado por corte y otras modificaciones antes de salir del núcleo. El corte requiere de la ayuda de un multicomponente estructural conocido como “espliceosoma”

35 Existen secuencias específicas en los límites exón-intrón

36 Intron loops out and exons brought closer together
Moléculas de RNA-proteína (snRNP) son las responsables del corte Intron loops out and exons brought closer together

37 Intron will be degraded and the snRNPs used again

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41 Puede existir corte alternativo en los genes

42 El corte alternativo puede producir varias isoformas
a partir de un gen

43 Terminación (Poliadenilación)

44 El RNA es cortado y la enzima
Poli-A polimerasa (PAP) agrega A´s

45 Proteínas de unión al poli-A
se unen al extremo 3´ hasta que el mensaje sale del núcleo

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47 Procesamiento del rRNA y tRNA
La RNAasa P, una endonucleasa que reconoce la conformación del extremo 5´ corta un grupo de nucleótidos dejando este extremo en su forma final. La RNAasa P es una ribonucleoproteína formada por un RNA de 377 nucleótidos y una proteína de 20 KDa. En este complejo la acción catalítica la aporta el RNA. Es posible que la RNAasa P actúe antes que la transcripción culmine. En el extremo 3´ actúa una endonucleasa no caracterizada que elimina un grupo de bases, después una exonucleasa, la RNAsa D elimina los restantes nucleótidos. El triplete CCA característico de estas moléculas es añadido por una RNAt nucleotidil tranferasa

48 eucariontes

49 INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPCIÓN
ACTINOMICINA D y ACRIDINA: inhiben la elongación. Se intercalan en el DNA entre sucesivos pares GC, deformando la doble hélice, impidiendo el avance de la RNA polimerasa. RIFAMPICINA: antibiótico que se une a la subunidad  de la RNA polimerasa bacteriana, impidiendo el inicio de la transcripción. -AMANITINA: inhibidor específico de la transcripción en eucariotas. Tóxico veneno producido por el hongo Amanita phalloides. Bloquea la síntesis de mRNAs por la Pol II y a altas concentraciones a Pol III. NO AFECTA A LA RNA POLIMERASA BACTERIANA.

50 a-amanitina Es un octapéptido bicíclico que se obtiene del hongo Amanita phalloides. Inhibe la transcripción de la RNA polimerasa II eucarionte.  

51 Promotor: secuencias de ADN que es reconocida por
la ARN polimerasa y proteínas asociadas a ella para iniciar la transcripción purina