Aplicaciones Plásmidos

Presentación del tema: "Aplicaciones Plásmidos"— Transcripción de la presentación:

1 Aplicaciones Plásmidos
Moléculas de DNA doble cadena que replican independientemente del cromosoma bacteriano que llevan información no indispensable para la supervivencia pero si que le confiere una ventaja adaptativa Ej: Resistencia a antibióticos, enzimas de restricción, enzimas para degradar sustratos poco comunes, toxinas etc. El replicar independientemente, ser pequeños y de fácil manejo (se pueden aislar y transferir a otras bacterias facilmente) los hacen candidatos ideales para utilizar como vectores para transportar informción genética. Aplicaciones Transferir material genético Aislar y estudiar genes Amplificar Fragmentos de DNA Transcripción in vitro Expresar proteínas Secuenciar Generar alelos de un gen, mutaciones.

2 Características generales
Plásmidos Tipos de plásmidos Clonado Expresión Suicidas Killer Shuttle Características generales MCS Ori R

3 Sitio múltiple de clonado
Plásmidos Sitio múltiple de clonado Región donde se agrupan secuencias de reconocimiento para enzimas de restricción. Estas secuencias no se repiten en ningún otra lugar del vector Origen de replicación Copia única Bajo número de copias (15-20 copias) Intermedio número de copias ( copias) Alto número de copias ( copias) Los replicones que más se usan son los derivados de pS101, pBM1 o colE1. pS101 pertenece a un grupo de compatibilidad diferente que pBM1 y colE1

4 Antibióticos Plásmidos
Ampicilina, B-lactámicos. Inhibe pared celular. Bacteriostático. R: b-lactamasa Kanamicina, aminoglucósidos. Interfiere en la síntesis proteica (interactúa con proteínas ribosomales y con algunas bases del 30S). Bactericida R: fosfotransferasa Tetraciclina, Tetraciclinas. Interfiere en la síntesis proteica (interrumpe la unión codón-anticodón). Bactericida. R: antitransportadora Cloranfenicol. Interfiere en la síntesis proteica (inhibe peptidil transferasa). Bactericida. R: acetiltransferasa

5 Pásmidos de clonado pBR322 Plásmidos
Segundo sistema de selección: sistema de selección de inserto pBR322 BamHI SpHI Amp R= MCS SalI Cepa: AmpS, TetS Tamaño: 4361 pb ColE1, no Relajado Tet R

6 Series pUC Plásmidos Frag a LacZ Cepa: AmpS, ∆M15 DH5a, Xl1Blue
LaqI BamHI EcoRI 5-ATG AAT GGA TCC CCC GAA TTC CAG CAT TAG-3 5-CAT TTA CCT AGG GGG CTT AAG GTC GTA ATC-3 p Lac O Lac Cepa: AmpS, ∆M15 DH5a, Xl1Blue Tamaño: 3162 pb ColE1, no Relajado/relajado Amp R

7 pBlueScript SK/KS Plásmidos Frag a LacZ ColE1, relajado
LaqI KpnI SacI Frag a LacZ p Lac pT7 O Lac 5´ 3´ pT7 pT3 pT3 ColE1, relajado Cepa: AmpS, ∆M15 DH5a, Xl1Blue Tamaño: 2958 pb Amp R

8 pGEM-T Plásmidos Frag a LacZ Cepa: AmpS, ∆M15 DH5a, Xl1Blue
LaqI EcoRI EcoRI -T T- Frag a LacZ p Lac sP6 O Lac T3 Cepa: AmpS, ∆M15 DH5a, Xl1Blue Tamaño: 3015 pb ColE1, relajado Amp R

9 pZeRO Plásmidos Frag a LacZ/ccdb Cepa : KanS , ccda- ColE1, relajado
LACI XbaI XhoI p Lac 5´ 3´ pSp6 pT7 pSp6 O Lac pT7 Cepa : KanS , ccda- Top10 Tamaño: 3298 pb ColE1, relajado Kan R

10 Plásmido de expresión Plásmidos ColE1, relajado Tamaño: 3-5 kpb Kan R
XbaI XhoI ColE1, relajado LaqI pT7 O Lac RBS Tamaño: 3-5 kpb