CAMINO PARA LA MEJORA DE AISLAMIENTOS

Presentación del tema: "CAMINO PARA LA MEJORA DE AISLAMIENTOS"— Transcripción de la presentación:

1 CAMINO PARA LA MEJORA DE AISLAMIENTOS

2 Aislamiento en huevo embrionado Aislamiento en cultivo celular
Antecedentes Reunión “Detección y Diagnóstico de Influenza y Otros Virus Respiratorios”. 09 a 10 de Noviembre de 2015, Sede de la OPS/OMS. Washington – DC – Estados Unidos. Mesa de trabajo. “Cultivo y aislamiento viral. Desafíos y pasos a seguir” con los representantes de los Centros Nacionales de Influenza de Brasil, Chile, Colombia, Ecuador, Honduras y México. Aislamiento en huevo embrionado Aislamiento en cultivo celular

3 Se discutieron los siguientes puntos:
Dinámica de trabajo Se discutieron los siguientes puntos: Factores que dificultan el aislamiento en cada país. Mejoras que han realizado en su país para incrementar el porcentaje de aislamiento. Propuestas para mejorar el aislamiento viral en América.

4 Factores que dificultan el aislamiento en cada país
Los nuevos profesionistas virologos ya no quieren realizar el aislamiento viral debido a la implementación de técnicas moleculares. Un problema importante en algunos Centros Nacionales de Influenza es la falta de personal para realizar el aislamiento (Aislamiento una o dos veces al año). Falta de capacitación en cultivo, aislamiento y caracterización. No hay disponibilidad de infraestructura, reactivos e insumos Muestras que no conservan la red fria desde la toma hasta la inoculación. Envío tardio de muestras para el aislamiento Muestras inadecuadas

5 2. Mejoras que han realizado en cada país para incrementar el porcentaje de aislamiento.
Toma de muestra de exudado faríngeo y nasofaríngeo en un solo tubo para incrementar la probabilidad de aislamiento. Implementación de otras líneas celulares diferentes a MDCK (MDCK SIAT). Monitoreo de micoplasma al descongelar la línea celular y durante su uso. Utilización de líneas celulares (MDCK) con pase no mayor a 25. Garantizar la adquisición de huevos embrionados de 7 a 9 días, con buena irrigación y cascarones no porosos. Disminuir procesos de congelación y descongelación Evitar mantener la muestra a 4ºC por tiempos prolongados

6 3. Qué proponen para mejorar el aislamiento viral en América
Brindar cursos de capacitación en cultivo celular, aislamiento en cultivo celular y huevo embrionado y caracterización de aislamientos por inhibición de la hemaglutinación. Compartir y homologar protocolos de aislamiento Concientizar a todo el personal involucrado en la toma, embalaje, envío, recepcion y proceso de la muestra para mantener la cadena fria de las muestras y la importancia que tienen los aislamientos de influenza en la vigilancia mundial y la formulación de anual de la vacuna.

7 Mejora en las condiciones de aislamiento de influenza y otros virus respiratorios NIC México

8 Establecimiento de las condiciones de cultivo de OVR
Condiciones utilizadas para el aislamiento de HAdV WILLIAMS, JF. Enhancement of Adenovirus plaque formation on HeLa cells by magnesium chloride. J. Gen. Virol. 9: (1970). LAVERY, D. et al. Productive infection of cultured human lymphoid cells by Adenovirus. J. Virol. 61: (1987). KRISHER, KK. et al. Evaluation of three types of cell culture for recovery of Adenovirus from clinical specimens. J. Clin. Microbiol. 25: (1987).

9 Establecimiento de las condiciones de cultivo de OVR
Comparación de las diferentes condiciones utilizadas para el aislamiento de HPIV VAN WIKE COELINGH, KL. et al. Naturally ocurring HPIV-3 viruses exhibit divergence in amino acid sequence of their fusion protein neutralization epitopes and cleavage sites. J. Virol. 64: 1329/1334 (1990). FRANK, AL. et al. Comparison of different tissue cultures for isolation and quantitation of Influenza and Parainfluenza viruses. J. Clin. Microbiol. 10: (1979). WANER, JL. et al. Production of monoclonal antibodies against PIV-3 and their use in diagnosis by immunofluorescence. J. Clin. Microbiol. 22: (1985).

10 CONDICIONES PARA AISLAMIENTO VIRAL
Establecimiento de las condiciones de cultivo de OVR Comparación de las diferentes condiciones utilizadas para el aislamiento de HMPV CARACTERÍSTICAS CONDICIONES PARA AISLAMIENTO VIRAL Otros Autores InDRE ESTANDARIZACIÓN Línea Celular VERO HEp-2 LLC-MK2 - Medio de Mantenimiento MEM+0.02% Tripsina MEM+2 µg/mL Tripsina MEM+Tripsina MEM+0.2% TPCK Tiempo de Incubación 10-14 días 22 días 14 días 14 días en rotación Temperatura de Incubación 37 °C Atmósfera Húmeda / CO2 2. Si / 5% No VAN DEN HOOGEN, BG. et al. A newly discovered human pneumovirus isolated from young children with respiratory tract disease. Nat. Med. 7: (2001). DEFFRASNES, C. et al. Analysis of replication kinetics of the Human Metapneumovirus in different cell lines by real-time PCR. J. Clin. Microbiol. 43: (2005). DERDOWSKI, A. et al. Human Metapneumovirus nucleoprotein and phosphoprotein interact and provide the minimal requirements for inclusión body formation. J. Gen. Virol. 89: (2008).

11 Establecimiento de las condiciones de cultivo de OVR
Comparación de las diferentes condiciones utilizadas para el aislamiento de HREV NIJHUIS, M. et al. Rapid and sensitive routine detection of all members of the genus Enterovirus in different clinical specimens by real-time PCR. J. Clin. Microbiol. 40: (2002). VERSTREPEN, WA. et al. Rapid detection of Enterovirus RNA in cerebrospinal fluid specimens with a novel single-tube real-time reverse transcription-PCR assay. J. Clin. Microbiol. 39: (2001). REINA, J. et al. Evaluación de diferentes muestras clínicas y líneas celulares en el aislamiento de Enterovirus en pacientes pediátricos. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 18: (2000).

12 Aislamiento. Situación actual

13 Gracias