Secuenciación Dra. María Isabel Fonseca. Secuenciación El análisis más detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de nucleótidos.

Presentación del tema: "Secuenciación Dra. María Isabel Fonseca. Secuenciación El análisis más detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de nucleótidos."— Transcripción de la presentación:

1 Secuenciación Dra. María Isabel Fonseca

2 Secuenciación El análisis más detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de nucleótidos.

3 Secuenciación Procedencia de las Muestras – Clonación – PCR – Fragmentos procedentes de digestión – Bandas recortadas a partir de geles

4 Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert Se basa en la hidrólisis química Se aplica a secuencias de ADN de menos de 250 nt Posee tres etapas – marcaje del ADN – Hidrólisis química selectiva del ADN – Análisis de los productos

5 Método químico de secuenciación del ADN: Maxam y Gilbert

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9 Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. Un enzima que replique el ADN, normalmente la ADN Polimerasa I del bacteriofago T4. Un cebador o "primer" Los cuatro nucleótidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP y dTTP). A veces en vez de marcar radiactivamente el cebador, se marca radiactivamente uno de los cuatro nucleótidos trifosfato en cada reacción. Por último, se necesitan nucleótidos didesoxi (ddATP, ddTTP, ddCTP y ddGTP). Componentes

10 Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger

11 didesoxirribonucleótido EJ: didesoxiciticina- trifosfato (ddCTP) desoxirribonucleótido EJ: desoxiciticina- trifosfato (dCTP) Método enzimático de secuenciación del ADN: Sanger

12 Secuenciacion: Método enzimático

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15 Secuenciación automática

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17 Resolver Método de secuenciación: Maxam y Gilbert Describir la secuencia que se deduce a partir del gel G A+G C+T C

18 Respuesta G A+G C+T C ATCTGACCCTAGTCCATCTGACCCTAGTCC

19 Resolver Método de secuenciación: Sanger Describir la secuencia de la hebra molde Describir la secuencia que se deduce a partir del gel

20 Respuesta