El promotor Pu del plasmido TOL
CH3 COOH CH3 OH CH3 TCA Xyl UWCMABN Operón superior (upper) Xyl XYZL toluato dioxigenasa Xyl TEGFJQKIH C2,3O et al Operón inferior (meta) El sistema TOL de Pseudomonas putida
xylUWCMABN PuPm xylXYZLTEGFJQKIHxylS PsPr xylR operón upper operón meta benzoato m, p-xileno La regulación del sistema TOL benzoato CH 3 R COOH R
Organización del promotor Pu ARNpol 54 IHF XylR CH 3 R -24/ / UAS distal -173/-162 UAS proximal -135/-124
XylRIHF E 54 La curvatura del ADN en Pu -24/-12-79/ / La curvatura de IHF... Acerca proteinas distantes Ayuda a reclutar la ARNP Suprime la activación promiscua
El regulador transcripcional XylR A (receptor) Interdominio B Unión ATP C (activación) D HTH Unión a ADN en Pu y Ps COOH NH Reconocimiento y unión del efector Hidrólisis ATP Multimerización Contacto- 54
R R XylR activo B D A C XylR inactivo Represión intramolecular, Interacciones A-C específicas Unión al dominio A Liberación de represión Activación de XylR en respuesta a inductores R
XylR∆A es un activador constitutivo A (receptor) C (activación) D HTH C N C (activación) D HTH C N XylR XylR∆A 219
ATP ADP+P i ARNpol Iniciación Pu XylR∆A dímero UAS distalUAS proximal Activación de la transcripción en Pu Oligomerización
in vivo in vitro
Physiological Regulation : the phenomenon GluGlnFrcGlySuc no inducer inducer Growth (OD 600 ) Exponential SilencingCarbon Source Inhibition ß-Gal Activity (Miller U. X1000) lacZ Pu xylR
El control fisiológico no depende de XylR XylR (wt)XylR∆A
Exponential silencing: the role of 54.. Growth (OD 600 ) Entry into stationary phase
Inhibición por Carbono de Pu
El cluster rpoN en P. putida
EIHPrEII Sugar(out) EI-P HPr-P EII-P Sugar-P(in) Pyruvate PEP
Mutaciones en ptsN eliminan la inhibición por carbono
GLU + GLU ß-Gal Activity (Miller Units x1000) MAD2 ptsN:: Km ptsN:: Km WT ptsN:: Km ptsN:: Km ptsNH68AptsN68D IIA Ntr PtsN debe fosforilarse para ejercer su acción represora
El cluster rpoN en P. putida
El papel de pts MAD2 ptsO::Km ptsOH15A ptsO::Km - GLU + GLU ß-Gal Activity (Miller Units x1000) Npr WT ptsO::Km
lacZ Pu xylR NPr~P+IIA NPr+IIA ~P Ntr Glucosa +
Controls are independent. - GLU + GLU ptsN::Km MAD2 + GLUWT + Sigma54 Growth (OD 600 ) ß-Gal Activity (Miller Units x1000) PtacrpoN
Our current model Specific Regulation Physiological Regulation CH 3 3 XylR IHF 54 -RNAPol Exponential Silencing IIA Ntr Npr