Vilmarie Figueroa Nieves Victor Torres Tania N. Pérez Del Río Laboratorio # 3 Tinción Gram, simple, negativa, cápsula, catalasa y oxidasa Identificación de cocos Vilmarie Figueroa Nieves Victor Torres Tania N. Pérez Del Río

Tinción Gram y Tinción Simple

Tinción Simple Materiales: Mechero “Loop” de inoculación Un cultivo de 24 horas de cualquier bacteria Azul de metilo Cristal violeta Carbol fuchsin Mechero “Loop” de inoculación Bandeja de tinción Microscopio Papel de lente Porta objeto

Conceptos Básicos de Tinción Visualización de los microorganismos se dificulta por: Tamaño Transparencia Decoloración

Conceptos Básicos de Tinción Químicamente la tinción es un compuesto orgánico: Benceno Compuesto orgánico sin color Cromóforo Auxocrómo Imparte color al Benceno Grupo químico que permite la ionización al grupo cromógeno

Conceptos Básicos de Tinción Técnicas de tinción Tinción Simple Tinción Gram Morfología: cocos, bacilos y espirilos. Arreglo: cadenas, agrupaciones, pares y tétradas. Grupos: gram+ y gram- Visualización: flagelados, cápsulados, esporas y núcleos.

Conceptos Básicos de Tinción Fijación de las bacterias Coloque una o dos  gotas de el agua en el centro de la laminilla. 1.

Conceptos Básicos de Tinción Fijación de las bacterias Con un movimiento circular, riega la suspensión en la laminilla aproximadamente del tamaño de 10¢. 2.

Conceptos Básicos de Tinción Fijación de las bacterias Transfiere una pequeña cantidad del inóculo bacterial del cultivo a la gota de agua. Riega el mismo de forma circular aproximadamente del tamaño de 5¢. 3.

Conceptos Básicos de Tinción Fijación de las bacterias Dejar que se seque el frotis. Aguantando la laminilla por un extremó, rápidamente pásala por el mechero de dos a tres veces. 4.

Tinción Simple Procedimiento: Preparar el frotis de la bacteria. Poner una laminilla en la bandeja de tinción e inundar el frotis con los indicadores de tinción.

Tinción Simple Se utiliza un sólo reactivo colorante: Carbón fuchsin: 15 a 30 segundos Cristal Violeta: 20 a 60 segundos Metíl Azul: 1 a 2 minutos Echerichia coli Bacillus cereus Staphylococcus aureus

Tinción Simple Resultados Metil Azul Cristal Violeta Carbón Fuchsin Dibujo Organismo Morfología celular: -Forma -Arreglo Color ____________

Tinción Simple Resultados Cilíndrico Esférico Espiral Helicoidal

Tinción Gram

Tinción Gram La mas importante tinción utilizada en bacteriología es la tinción Gram, nombrado por el Dr. Christian Gram. Este divide las células bacterianas en dos grandes grupos, Gram positivo (+) y Gram negativo (–), el cual es un gran instrumento para la clasificación y diferenciación de los microorganismos.

Tinción Gram Objetivos: Demostrar las bases químicas y teóricas para diferencial el procedimiento de tinciones. Demostrar las bases químicas de una tinción. Diferenciar entre dos principales grupos de bacterias: Gram + y Gram -

Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas: Principios: Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas: Gram Positivas Gram Negativas

Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas: Principios: Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas:

Peptidoglucano: Principios: Copolímero formado por secuencias de: N-acetil-glucosamina Acido N-acetilmurámico Por enlaces β-1,4

Bacterias Gram Positivas Principios: Bacterias Gram Positivas Bacillus anthracis

Bacterias Gram Negativas Observaciones Bacterias Gram Negativas Escherichia coli

Tinción Gram 1 Se utiliza un sólo reactivo colorante: 2 3 7 6 5 4 Cristal Violeta: 1 minuto Iodo: 1 minuto Alcohol: 10 a 15 segundos Safranina: 45 segundos 2 3 7 6 5 4

Tinción Gram

Tinción Gram Resultados E. Coli B. Cereus S. aureus ____________ Dibujo Organismo Morfología celular: -Forma -Arreglo Color ____________

Bacterias Gram Negativas Observaciones Bacterias Gram Negativas Proteus vulgaris

Serratia marcescens GRAM -

Bacterias Gram Positivas Observaciones Bacterias Gram Positivas

Micrococcus luteus GRAM +

Spirillum

Spirillum