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Publicada porXavier Robles Fidalgo Modificado hace 8 años
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Desarrollo de nuevas metodologías para determinación de capacidad antioxidante de polifenoles
Ph.D. Elias Atala Riffo
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MUERTES POR ENFERMEDAD CVD MUERTES POR TODAS LAS CAUSAS
LOW INTAKE OF FRUITS, BERRIES AND VEGETABLES IS ASSOCIATED WITH EXCESS MORTALITY IN MEN: THE KUOPIO ISCHAEMIC HEART DISEASE RISK FACTOR (KIHD) STUDY Rissanen et al. J. Nutr. 133: 199–204 (2003). MUERTES POR ENFERMEDAD CVD MUERTES POR TODAS LAS CAUSAS EN UNA POBLACIÓN DE FINLANDESES DE MEDIANA EDAD, LOS QUINTILES QUE TUVIERON UNA MAYOR INGESTA DE FRUTAS-BERRIES -VERDURAS MOSTRARON MENORES TASAS DE MUERTE ACUMULATIVAS, POR CAUSAS CV O MULTIPLES. Paredes-Lòpez et al. Berries: Improving Human Health and Healthy Aging, and Promoting Quality Life—A Review. Plant Foods Hum Nutr (2010) Basu et al. Berries: Emerging impact on cardiovascular health. Nutr. Rev. (2010)
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Resumen de la evidencia científica de la relación entre consumo de frutas y verduras y disminución del riesgo de padecer enfermedades crónicas. Boeing et al. Critical review: vegetables and fruit in the prevention of chronic diseases. Eur J Nutr. (2012) 51(6):637-63
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Se han descrito más de 3000 polifenoles diferentes.
(PFT) FRUTAS & HORTALIZAS Se han descrito más de 3000 polifenoles diferentes.
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Grupos y subgrupos de polifenoles presentes en frutas y verduras
Se han descrito más de 4000 polifenoles diferentes
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Ácidos fenólicos Flavonoides OH OH OH OH OH OH O OH Derivados de
Ácidos benzoicos Derivados de Ácidos Cinámico OH O OH OH OH Ácido gálico… Quercetina, galangina, rutina… Ácido ferúlico, caféico…
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Acción antioxidante directa
Transferencia de Hidrogeno (HAT) / Transferencia de Electrones (SET) (n)ROO• + PhOH → (n)ROOH + PhO• / (n)ROO• + PhOH → (n)ROO− + [PhOH]•+ ROO• ROOH PhOH Acción antioxidante directa
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ROO. Método ORAC Método ORAC: (1) (2) (3) (4) BLANCO ANTIOXIDANTE
RADICAL LIBRE Ensayos competitivos de un antioxidante (PhOH) y una molécula blanco (MB) Ensayo ORAC ROO. C. López-Alarcón, E. Lissi, Free Radical Research, 39;7 (2005) 729–736. D. Di Majo et al. Journal of Food Composition and Analysis, 24 (2011)
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Estiman capacidad AOX a pH neutro
Metodologías tipo ORAC Estiman capacidad AOX a pH neutro Diferentes moléculas blanco: Diferente información antioxidante Generación de tiempos de inducción por XH Ampliamente utilizada. Creación de bases de datos para una amplia variedad de frutas y verduras. ORAC-Fl Relacionados con la estequiometria de XH frente a ROO● Cambios en la vi de consumo de PGR ORAC-PGR Relacionado con la reactividad de XH frente a ROO● H. Speisky et al. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 12;60 (2012) E. Pino, A. M. Campos, E. Lissi, International Journal of Chemical Kinetics, 35;10 (2003) 525–531.
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ER + Producto de oxidación de PGR
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Determinación de fenoles totales
simples, económico, no requiere equipos especializados habilidad de reducir el reactivo de Folin (mixtura de fosfotúngstico/fosfomolíbdico) MÉTODO DE FOLIN-CIOCALTEU (FC) [Singleton VL, Rossi JA (1965) Am J Enol Vitic 16:144–158]. Mo6+ (amarillo) + ArOH → Mo5+ (azul a 750 nm) + [ArOH]•+
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¿o metabolitos oxidados?
Mecanismo de acción antioxidante indirecto de polifenoles ¿o metabolitos oxidados? POLIFENOLES Aumento en la producción celular de enzimas antioxidantes
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Agradecimientos: Universidad de Talca Comité organizador PIEI-ES Lab
Agradecimientos: Universidad de Talca Comité organizador PIEI-ES Lab. AOX INTA-UCH Lab. Radicales Libres PUC Muchas gracias
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Fuente: http://www.portalantioxidantes.com (INTA)
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En condiciones normales la velocidad de generación de ER es similar a la capacidad del organismo para neutralizarlas. ER
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Estado de Estrés Oxidativo
Introducción Macromoléculas ERN ERO El daño a macromoléculas se asocia a la patogenia de diversas enfermedades.* Proteínas ER Defensas antioxidantes Lípidos ER Estado de Estrés Oxidativo ADN ER *B.Halliwell, J. M. C. Gutteridge. Thirdedition 1999, Oxoford Science Publications. Z. Ďuračková. Physiol. res. 59: ; 2010.
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¿ Por qué estudiar el estrés oxidativo?
Introducción ¿ Por qué estudiar el estrés oxidativo? Concepto: daño producido por la superproducción de especies reactivas de oxígeno (ROS) de manera que se produce un desequilibrio entre éstas y los mecanismos de defensa antioxidante . patogénesis de enfermedades
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patogénesis de enfermedades Diabetes Mellitus
Enfermedades cardiovasculares neurodegenerativas Alzheimer Parkinson Inmunoinflamatorias Ciertos tipos de cáncer
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Metodología ORAC Introducción
Curso temporal de la reacción entre fluoresceína (70 nM) y radicales peroxilo. (λex= 493 nm, λem= 515 nm). () Control; () quercetina 1 µM. [ABAP] = 10 mM. t = 37ºC. Ou B, Hampsch-Woodill M, Prior R. J. Agric. Food Chem. 2001;49:
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Metodología ORAC Introducción 2HCl ABAP
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Metodología ORAC Introducción Método ORAC-pirogalol rojo (ORAC-PGR): A
B Protección de Fluoresceína (A) o pirogalol rojo (B) por Trolox. () Control. López-Alarcón C, Lissi E. Free Radic. Res., 2005;39: López-Alarcón C, Lissi E. Free Radic. Res., 2006;40:
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Estado de Estrés Oxidativo
Introducción ERN ERO El daño a macromoléculas se asocia a la patogenia de diversas enfermedades. ER Sistemas antioxidantes ER ER ER Estado de Estrés Oxidativo
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En condiciones normales todos los organismos aerobios generan especies reactivas (ER)
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Fuentes biológicas de las Especies Reactivas de Oxígeno (ROS)
Introducción Fuentes biológicas de las Especies Reactivas de Oxígeno (ROS) In vivo, las ROS se forman por tres mecanismos: • Reacción secundaria del transporte electrónico mitocondrial. • Reacción del O2●- con iones metálicos. • Reacciones enzimáticas normales (oxidasas). 2O2●- + 2H+ O2 + H2O2 Fe3+ + O2●- Fe2+ + O2 Fe2+ + H2O2 Fe3+ + HO● + OH- SOD Reacción de Fenton Generación O2●- mitocondrial
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Introducción Anión superóxido (O2●- ) como especie clave O2●-
NO● HO● +NO2● ONOO- H2O2 Fe2+ Fe3+ TOXICIDAD CELULAR HO●
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¿ Qué tipos de defensas existen frente al estrés oxidativo ?
Introducción ¿ Qué tipos de defensas existen frente al estrés oxidativo ? Defensa antioxidante No enzimáticas endógenas exógenas enzimáticas
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Defensas antioxidantes enzimáticas
Introducción Defensas antioxidantes enzimáticas ENDÓGENOS Tioredoxinas SOD CAT GSH-peroxidasa GSH-transferasa
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Mecanismos de defensa antioxidante enzimático
Introducción Mecanismos de defensa antioxidante enzimático Radicales libres GSH peroxidasa GSH reductasa
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Defensas antioxidantes no enzimáticos
Introducción Defensas antioxidantes no enzimáticos ENDÓGENOS glutatión bilirrubina albúmina ácido úrico EXÓGENOS Tocoferol (vitamina E) B-caroteno (vitamina A) ácido ascórbico (vitamina c) POLIFENOLES
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(PFT) FRUTAS & HORTALIZAS
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METODOLOGÍAS DETERMINACIÓN ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ENSAYO ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity) ROO· + FL + AOX ROOH + FL (ABC FL.) ROO·
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