Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas 4) Para conocer  G, imprescindible conocer mecanismo Para reacción D N K P = [N]/[D] 2D N 2 K P = [N 2.

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1 Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas 4) Para conocer  G, imprescindible conocer mecanismo Para reacción D N K P = [N]/[D] 2D N 2 K P = [N 2 ]/[D] 2 D ↔ I 1 ↔ I 2 … ↔ I n ↔ N K P =  K i

2 Caracterización de estabilidad de proteínas Calorimetría de barrido diferencial (DSC) 1)Permite determinar mecanismo de desplegamiento/plegamiento 2) Medición de  H,  S y  Cp para cada etapa

3 Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas Calorimetría de barrido diferencial (DSC)

4 Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas

5 280300320340360380 0 1000 2000 3000 4000 2  H = 60 kcal/mol  H = 30 kcal/mol  H = 60 kcal/mol C exc (kcal/mol) Temperatura (K) Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas  lnK eq /  (1/T) = -  H vH / R

6 280300320340360380 0 1000 2000 3000 4000  H = 30 kcal/mol  H = 60 kcal/mol C exc (kcal/mol) Temperatura (K) Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas  lnK eq /  (1/T) = -  H vH / R

7 Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas # unidades cooperativas  H vH  H cal /  H vH 11 21.5 32

8 Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas Herramienta de “desconvolución”

9 Caso ejemplar: Plasminógeno ~700 a.a.

10 Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC: Número de protones (  ) intercambiados en la reacción

11 Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC: Número de protones (  ) intercambiados en la reacción  = 1.05