Diagnóstico Virológico

Presentación del tema: "Diagnóstico Virológico"— Transcripción de la presentación:

1 Diagnóstico Virológico
Bioq. Alejandro Kuc

2 Importancia Determinar una intervención terapéutica
Definir el pronóstico en la evolución de un paciente Indicar la necesidad de una vacunación Adoptar medidas de salud pública en una comunidad: epidemiología. Tendencia: Sensibilidad y Rapidez Bioq. Alejandro Kuc

3 Métodos de Diagnóstico
Directos: presencia de virus en muestras clínicas Agente infeccioso: aislamiento viral Partícula viral: microscopía electrónica Antígenos virales: inmunomarcación Genomas virales: biología molecular Indirectos: respuesta de anticuerpos específicos antivirales en el suero del paciente Bioq. Alejandro Kuc

4 Tipo de Muestras Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeo
Lesiones Cutáneas: raspado e hisopado Sangre: aislamiento viral Suero: búsqueda de anticuerpos (serología) Materia Fecal: enterovirus Orina: aislamiento de CMV LCR: enterovirus y parotiditis Muestras oculares: hisopado Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímica Bioq. Alejandro Kuc

5 Transporte y conservación
Aislamiento Inmediatamente (inactivación y contaminación) No congelar Conservación Temp amb: horas 4ºC: 1-2 días -20ºC: meses -70ºC: años Bioq. Alejandro Kuc

6 Métodos Directos Bioq. Alejandro Kuc

7 1- Aislamiento Viral Huevos, Animales o Células
Tipos de cultivos celulares Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajes Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; subpasajes Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajes Variación en suceptibilidad Es indispensable el Diagnóstico presuntivo Bioq. Alejandro Kuc

8 Inoculación e incubación (ATB)
Decontaminar muestras no estériles Inocular en tubos de cultivo: de la muestra en medio con ATB 1 hr a 37º para permitir la adsorción Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-3 días. Bioq. Alejandro Kuc

9 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Tipo de ACP Wikipwdia Bioq. Alejandro Kuc

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12 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Bioq. Alejandro Kuc

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14 Detección de los efectos de los virus
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemaglutinación Bioq. Alejandro Kuc

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16 Cuantificación de virus
Detección de los efectos de los virus (Dx presuntivo: debe confirmarse) Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemaglutinación Interferencia Identificación Inmunofuoresencia Imunoperoxidasa Cuantificación de virus Titulación de punto final Plaqueo bajo agarosa Bioq. Alejandro Kuc

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18 2- Microscopía Electrónica
Métodos Inmunoelectromicroscopía Coloración negativa Ventajas Rápido (pocas muestras) Desventajas Costo del ME Baja Sensibilidad Bioq. Alejandro Kuc

19 3- Inmunoflourescencia
Técnica Directa Indirecta Ventajas Muestra estable Muy Sensible Muy Específica Rápido Desventajas Costo del MF Observador experimentado Bioq. Alejandro Kuc

20 IFI Bioq. Alejandro Kuc

21 IFI Bioq. Alejandro Kuc

22 IFI Bioq. Alejandro Kuc

23 IFI Bioq. Alejandro Kuc

24 IFI Bioq. Alejandro Kuc

25 IFI Bioq. Alejandro Kuc

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27 4- Aglutinación Ventajas Desventajas Sencillo Rápido
No requiere equipamiento Desventajas Poco especifica Bioq. Alejandro Kuc

28 5- Enzimoinmunoensayo (EIA)
Ventajas Muy Sensible No se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultáneamente Automatizable Desventajas Falsos Positivos (necesita confirmación) Bioq. Alejandro Kuc

29 Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay
ELISA Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay Bioq. Alejandro Kuc

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48 ELISA Competitivo Bioq. Alejandro Kuc

49 ELISA captura IgM Bioq. Alejandro Kuc

50 Tests Rápidos en un solo paso
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51 5- Radioinmunoensayo (RIA)
Fundamento idéntico a ELISA Ventajas Similar al ELISA Desventajas Reactivos Inestables Residuos Radiactivos Relativamente mas Costoso Bioq. Alejandro Kuc

52 Métodos Indirectos Bioq. Alejandro Kuc

53 Métodos Indirectos Detección de IgM Detección de IgG Seroconversión
Infección aguda Infección congénita FR: f+ ↑ IgG: f- IgM Captura Detección de IgG Seroconversión Recién Nacidos Avidez Δ >4 títulos Bioq. Alejandro Kuc

54 Técnicas Aglutinación de partículas IFI EIA RIA Western Blott ELISA
LIA RIA Western Blott Bioq. Alejandro Kuc

55 Western Blot Muy especifica Método confirmatorio Bioq. Alejandro Kuc

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58 Western Blot Bioq. Alejandro Kuc

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