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Resolución ejercicio de purificación por cromatografía Marzo, 2011.

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Presentación del tema: "Resolución ejercicio de purificación por cromatografía Marzo, 2011."— Transcripción de la presentación:

1 Resolución ejercicio de purificación por cromatografía Marzo, 2011

2 Resinas (3): Carboximetil (CM)-sefadex G25, Dietilaminoetil (DEAE)-celulosa, Sefadex-G25 Amortiguadores: 1 M Acetato de potasio pH 6.0; 0.1M Acetato de potasio pH 6.0 2M HCl. Y la disponibilidad de diluirlas si así lo desean.

3 Hay muchas resinas disponibles en el mercado como:

4 Columnas de intercambio iónico sugeridas: Matrix agarose, dextran, acrylamide, same as for gel filtration exclusion limit. Charged groups I. Positively charged groups anion exchangers: -DEAE (di-ethylaminoethyl) weak anion -QAE (quaternary aminoethyl) strong anion II. Negatively charged groups cation exchangers: -CM (carboxymethyl) weak cation -SP (sulfopropyl) strong cation

5 Purificación mediante cromatografías sucesivas, este es un ejemplo pero podrían haber sido varias las respuestas Cromatografía de intercambio iónico Cromatografía de exclusión molecular Mezcla por separar equilibrada a pH 6.0 con 0.1M acetatos: Blue-Dextran Yellow-Dextran Citocromo c Vitamina B12 DNP-glicina Salen primero Blue-Dextran Yellow-Dextran Citocromo c DEAE -celulosa equilibrada a pH 6.0, se unirán los 3, (aunque débilmente el citocromo c) Orden de elución: 1. Citocromo c, 1I. Yellow Dextran III. Blue-Dextran Salen al final Vitamina B12 DNP-glicina CM-celulosa no se une o se une poco la DNP –glicina (debido al peso y carga) Orden de elución: I. DNP glicina II. Vitamina B12 1M HCl 1M KAc DEAE CM Eluyente


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