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TRABAJO FIN DE CARRERA TRABAJO FIN DE CARRERA CONTROL BIOLÓGICO DE Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 1.2 CON ANTAGONISTAS. ALUMNA: RAQUEL SOBRINO.

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1 TRABAJO FIN DE CARRERA TRABAJO FIN DE CARRERA CONTROL BIOLÓGICO DE Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 1.2 CON ANTAGONISTAS. ALUMNA: RAQUEL SOBRINO RUBIO. ALUMNA: RAQUEL SOBRINO RUBIO. DIRECTORES DEL PROYECTO: DIRECTORES DEL PROYECTO: - Mª LUISA SORIANO MARTÍN - ANDRÉS PORRAS PIEDRA FECHA DE PRESENTACIÓN: MAYO FECHA DE PRESENTACIÓN: MAYO 2005.

2 2 IMPORTANCIA ECONÓMICA DEL CULTIVO DEL MELÓN PRODUCCIÓN EN ESPAÑA DE 1 MILLÓN DE TONELADAS PRODUCCIÓN EN ESPAÑA DE 1 MILLÓN DE TONELADAS SUPERFICIE: SUPERFICIE: -75% CULTIVOS AL AIRE LIBRE -25% CULTIVOS PROTEGIDOS EN CLM90% EN CIUDAD REAL EN CLM90% EN CIUDAD REAL

3 3 INTRODUCCIÓN A LA FUSARIOSIS VASCULAR DEL MELÓN condiciones de desarrollo ~20º C. primeros trabajos sobre el estado sanitario de los melonares de Levante y Murcia en en 1985 se describe la micosis en cultivos bajo plástico en Almería.

4 4 FUSARIOSIS VASCULAR DIFICULTAD DE CONTROL DE LA FUSARIOSIS VASCULAR enfermedad muy virulenta. reducción de la producción hasta un 90%.

5 5 INTRODUCCIÓN AL CONTROL BIOLÓGICO VENTAJAS respetuoso con el medio ambiente respetuoso con el medio ambiente no existen problemas de intoxicaciones no existen problemas de intoxicaciones no crea resistencia no crea resistencia eliminación casi completa de la utilización de productos fitosanitarios eliminación casi completa de la utilización de productos fitosanitariosINCONVENIENTES ignorancia sobre su utilización ignorancia sobre su utilización falta de apoyo económico falta de apoyo económico falta de personal especializado falta de personal especializado enemigos naturales susceptibles a productos fitosanitarios enemigos naturales susceptibles a productos fitosanitarios

6 6 INTRODUCCIÓN A LOS MICROORGANISMOS ANTAGONISTAS 1. ocurre con frecuencia en la naturaleza. 2. interacción continua entre patógenos potenciales y sus antagonistas. -equilibrio dinámico en la superficie del suelo- 3. microorganismos antagonistas: - BACTERIAS: Bacillus y Pseudomonas - HONGOS: Trichoderma y Micorrizas Arbusculares

7 7 MECANISMOS DE ACCIÓN DE LOS ANTAGONISTAS Competencia: debe existir escasez de un elemento. La competencia más común es por nutrientes, oxígeno o espacio. Competencia: debe existir escasez de un elemento. La competencia más común es por nutrientes, oxígeno o espacio. Interacción directa con el patógeno: Interacción directa con el patógeno: -Parasitismo: un microorganismo parasita a otro. - Predación: el antagonista se alimenta de materia orgánica entre la cual ocasionalmente se encuentra el patógeno. Antibiosis y lisis: inhibición del crecimiento de un organismo por la acción de una sustancia producida por otro organismo. Antibiosis y lisis: inhibición del crecimiento de un organismo por la acción de una sustancia producida por otro organismo.

8 8 OBJETIVOS 1. ESTUDIAR EL POSIBLE ANTAGONISMO FRENTE A Fom MEDIANTE ENFRENTAMIENTO DUAL IN VITRO 2. DETERMINAR LA EFICACIA DE LOS ORGANISMOS SELECCIONADOS EN EL CONTROL BIOLÓGICO DE Fom RAZA 1.2 EN PLÁNTULAS DE MELÓN 3. DETERMINAR LA EFICACIA DE LA COLONIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN CON MICORRIZAS VESÍCULO-ARBUSCULARES EN EL CONTROL BIOLÓGICO DE Fom.

9 MATERIALES Y MÉTODOS

10 10 ANTAGONISTAS UTILIZADOS EN EL CONTROL BIOLÓGICO Trichoderma harzianum Trichoderma harzianum Aspergillus A5, Aspergillus A8, Aspergillus terreus, Aspergillus flavus, Aspergillus ochraceus Aspergillus A5, Aspergillus A8, Aspergillus terreus, Aspergillus flavus, Aspergillus ochraceus Penicillum sp Penicillum sp Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens Bacillus subtilis Bacillus subtilis Fusarium oxysporum no patogénicos Fusarium oxysporum no patogénicos Glomus mosseae, Glomus intraradices, Glomus claroideum Glomus mosseae, Glomus intraradices, Glomus claroideum

11 11 MATERIAL VEGETAL Y PATÓGENO SEMILLAS DE MELÓN DEL CULTIVAR AMARILLO CANARIO F1 HÍBRIDO. SEMILLAS DE MELÓN DEL CULTIVAR AMARILLO CANARIO F1 HÍBRIDO. Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 1.2 AISLADO CR 6801 Fusarium oxysporum f. sp. melonis RAZA 1.2 AISLADO CR 6801

12 12 PRODUCCIÓN DE INÓCULO DEL PATÓGENO REPICADO DE Fom EN PDA. REPICADO DE Fom EN PDA. - repicado del patógeno en placas de petri con PDA. - estufa: 252º C, 7 días. REPICADO DE Fom EN CPD. REPICADO DE Fom EN CPD. -explante en matraz erlenmeyer. -agitador orbital (120 rpm), 25-27ºC, 16 horas luz, 6 días. -filtrado del hongo. -cuantificación de la densidad del inóculo. -ajuste de la concentración de inóculo.

13 13 CULTIVO DUAL IN VITRO CULTIVO DUAL consiste en el enfrentamiento del patógeno y el antagonista en una placa de petri, analizando el crecimiento de ambos que se compara con el crecimiento individual de cada uno de ellos. CULTIVO DUAL consiste en el enfrentamiento del patógeno y el antagonista en una placa de petri, analizando el crecimiento de ambos que se compara con el crecimiento individual de cada uno de ellos. SEPARACIÓN: SEPARACIÓN: - 7 cm (HONGOS) - 5 cm (BACTERIAS) ENSAYO: 3 PLACAS DE PETRI, 4 REPETICIONES ENSAYO: 3 PLACAS DE PETRI, 4 REPETICIONES TESTIGOS DE PATÓGENO TESTIGOS DE PATÓGENO TESTIGOS DE ANTAGONISTA TESTIGOS DE ANTAGONISTA

14 14 CULTIVO DUAL DE Fom Raza 1.2 CON Trichoderma harzianum pequeña cantidad del preparado de T. harzianum con pinzas esterilizadas en una placa de petri con PDA. pequeña cantidad del preparado de T. harzianum con pinzas esterilizadas en una placa de petri con PDA. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom y T. harzianum. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom y T. harzianum. placa de petri en estufa (27ºC). placa de petri en estufa (27ºC). mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas. mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas.

15 15 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Aspergillus A5, Aspergillus A8 y Penicillum sp. repicado de los hongos de la placa original en PDA. repicado de los hongos de la placa original en PDA. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom con Aspergillus y Penicillum. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom con Aspergillus y Penicillum. placa de petri en estufa (27ºC). placa de petri en estufa (27ºC). mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas. mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas.

16 16 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Aspergillus terreus, A. flavus y A. ochraceus. recuperación de los hongos liofilizados. recuperación de los hongos liofilizados. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom y Aspergillus. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom y Aspergillus. placa de petri en estufa (27ºC). placa de petri en estufa (27ºC). mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas. mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas.

17 17 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Pseudomonas fluorescens y Pseudomonas putida. 1. recuperación de las bacterias liofilizadas. 2. ensayo en: PDA y AGAR NUTRITIVO 3. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom y Pseudomonas en Agar Nutritivo (separación de 5 cm). 4. placa de petri en estufa (27ºC) 5. mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas

18 18 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Bacillus subtilis. ENSAYO EN PDA ENSAYO EN PDA - ENFRENTAMIENTO DE EXPLANTES DE 5 mm DE DIÁMETRO DE Fom Y Bacillus subtilis EN PDA (SEPARACIÓN DE 5 CM). - PLACA DE PETRI EN ESTUFA (27ºC) - MEDICIONES DEL DIÁMETRO DE LAS COLONIAS CADA 48 HORAS. ENSAYO CONTENIENDO EXUDADO DE Bacillus subtilis. - ENSAYO CON EXUDADOS DE Bacillus subtilis. - 5 EXPLANTES DE 5 mm. - MATRAZ ERLENMEYER CON CPD. - AGITADOR ORBITAL (120 rpm, 7 DÍAS, TOTAL OSCURIDAD, TEMPERATURA AMBIENTE). - COMPROBACIÓN DEL CRECIMIENTO. - SE AÑADE AGAR. - EXPLANTE DE Fom. - COMPROBACIÓN DEL DIÁMETRO DE LA COLONIA DE FOM CADA 48 HORAS.

19 19 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Fo NO PATOGÉNICO repicado de los hongos de la placa original en PDA repicado de los hongos de la placa original en PDA enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom con Fo NO PATOGÉNICO. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de Fom con Fo NO PATOGÉNICO. placa de petri en estufa (27ºC) placa de petri en estufa (27ºC) mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas

20 CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO

21 21 PRODUCCIÓN DE Trichoderma harzianum DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD DE INÓCULO DEL PREPARADO COMERCIAL MÉTODO DE LAS DILUCIONES MÉTODO DE LAS DILUCIONES - PDA CON NYSTANINA AL 1%. - DILUCIÓN DEL PREPARADO COMERCIAL EN 9 ml DE AGUA. - DILUCIONES EN 6 VIALES. - PLACAS DE PETRI EN ESTUFA (27ºC) - OBSERVACIÓN DE PLACAS CADA 12 HORAS.

22 22 PRODUCCIÓN DE Aspergillus A5 repicado del hongo en PDA en placa de petri con PDA (7 días,25-27ºC, oscuridad) repicado del hongo en PDA en placa de petri con PDA (7 días,25-27ºC, oscuridad) repicado del hongo en CPD repicado del hongo en CPD - 5 explantes de 5mm de diámetro en matraz de CPD - agitador orbital 120 rpm en cámara de crecimiento (6 días, 25-27ºC, 16 horas de luz) filtrado del hongo filtrado del hongo cuantificación de la densidad de inóculo cuantificación de la densidad de inóculo ajuste de la concentración de inóculo ajuste de la concentración de inóculo

23 23 GERMINACIÓN DE SEMILLAS DE MELÓN germinación en placas de petri germinación en placas de petri - capa de vermiculita - disco papel secante esterilizado - semillas - disco de papel secante esterilizado cámara de crecimiento (3 días, ºC, 16 horas luz) cámara de crecimiento (3 días, ºC, 16 horas luz) plantación en vasos de plástico perforados en la base o bandejas de alvéolos plantación en vasos de plástico perforados en la base o bandejas de alvéolos Etiquetan y enumeran con el antagonista utilizado. Etiquetan y enumeran con el antagonista utilizado. cámara de crecimiento (12 días) cámara de crecimiento (12 días)

24 24 APLICACIÓN DE LOS ANTAGONISTAS AL SUBSTRATO CADA ENSAYO: CADA ENSAYO: - 40 plántulas (4 repeticiones de 10 plántulas cada una) - 10 plántulas testigos antagonistas (control +) - 10 plántulas testigo con inóculo del patógeno (control -) - 10 plántulas testigo sin tratar (control ) SUBTRATO ESTÉRIL Y SUBTRATO NO ESTÉRIL SUBTRATO ESTÉRIL Y SUBTRATO NO ESTÉRIL

25 25 SUBSTRATO El substrato estéril se utiliza para observar el comportamiento de los microorganismos antagonistas y Fom sin que se encuentre sometido a la acción de otros microorganismos que se puedan hallar en el substrato (bacterias, hongos, etc.). El substrato estéril se utiliza para observar el comportamiento de los microorganismos antagonistas y Fom sin que se encuentre sometido a la acción de otros microorganismos que se puedan hallar en el substrato (bacterias, hongos, etc.). Los ensayos en substrato no estéril se realizan para observar el comportamiento de los microorganismos antagonistas y Fom en las condiciones en las que se encontrarían las plántulas de melón en el invernadero. Los ensayos en substrato no estéril se realizan para observar el comportamiento de los microorganismos antagonistas y Fom en las condiciones en las que se encontrarían las plántulas de melón en el invernadero.

26 26 TRATAMIENTO DEL SUBSTRATO CON Trichoderma harzianum Ensayos: Ensayos: a) dosis 55 gr/kg de substrato b) dosis 27.5 gr/kg de substrato Mezclar de forma homogénea Mezclar de forma homogénea Vasos de plástico perforados Vasos de plástico perforados Bandejas de alvéolos Bandejas de alvéolos Semilla germinada de melón Semilla germinada de melón Cámara de crecimiento Cámara de crecimiento

27 27 TRATAMIENTO DEL SUBSTRATO CON Aspergillus A5 Suspensión conídica concentración 10 7 conidias/ml Suspensión conídica concentración 10 7 conidias/ml En 100 ml de substrato se añaden 10 ml de suspensión conídica En 100 ml de substrato se añaden 10 ml de suspensión conídica Mezcla homogénea Mezcla homogénea Semilla germinada de melón Semilla germinada de melón Cámara de crecimiento Cámara de crecimiento

28 28 TRATAMIENTO DEL SUBSTRATO CON MICORRIZAS En 150 ml de substrato se añade una cucharilla de café rasa del preparado micorrízico En 150 ml de substrato se añade una cucharilla de café rasa del preparado micorrízico Semilla de melón germinada Semilla de melón germinada Cámara de crecimiento Cámara de crecimiento

29 29 INOCULACIÓN DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN CON EL PATÓGENO Suspensión de 5 x 10 5 conidias/ml de Fom Raza 1.2 Suspensión de 5 x 10 5 conidias/ml de Fom Raza 1.2 Se añaden 10 ml de suspensión a cada vaso que contiene las plántulas de melón. Se añaden 10 ml de suspensión a cada vaso que contiene las plántulas de melón. Cámara de crecimiento Cámara de crecimiento

30 30 REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDA. REAISLAMIENTO siembra en PDA de fragmentos de raíz, cuello y tallo (desinfestados) para comprobar si el patógeno ha sido capaz de colonizar el sistema vascular de las plantas tratadas con antagonistas e inoculadas con Fom

31 31 CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON MICORRIZAS ARBUSCULARES. A los 30 días del tratamiento. A los 30 días del tratamiento. 3 plantas por ensayo 3 plantas por ensayo Lavado de raíces Lavado de raíces Fragmentos de 2-3 cm Fragmentos de 2-3 cm Decoloración de raíces con KOH al 10%, temperatura ambiente Decoloración de raíces con KOH al 10%, temperatura ambiente Lavado y acidificación con CLH 0.1N durante 30 minutos. Lavado y acidificación con CLH 0.1N durante 30 minutos. Tinción con Azul Tripán (4 horas) Tinción con Azul Tripán (4 horas) Intervalos de 15 min, lavado con agua Intervalos de 15 min, lavado con agua Colocación de fragmentos en un porta-objetos de forma paralela Colocación de fragmentos en un porta-objetos de forma paralela Con el microscopio se realizan observaciones verticales en el porta-objetos tomando como referencia una distancia constante de 0.2 mm, y se anotan en 100 intersecciones si están o no micorrizadas.

32 32 EVALUACIÓN DE LA INCIDENCIA Y SEVERIDAD DE LA ENFERMEDAD ESCALA DE SEVERIDAD 0 0% PLANTA SANA % SÍNTOMAS LEVES % SÍNTOMAS SEVEROS % SÍNTOMAS MUY SEVEROS 4 >75% PLANTA MUERTA

33 RESULTADOS

34 34 1. RESULTADO DEL ENFRENTAMIENTO DUAL IN VITRO Finalización del ensayo: Finalización del ensayo: - Unión física entre las colonias de antagonista y patógeno - Halo de separación constante durante varias mediciones

35 35 RESULTADO DEL ENFRENTAMIENTO DUAL IN VITRO Halo de inhibición entre el patógeno y Aspergillus A5

36 36 DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD DE INÓCULO DEL PREPARADO COMERCIAL DE Trichoderma harzianum conteo a las 48 horas de realizarse las diluciones conteo a las 48 horas de realizarse las diluciones - incontables - placas dilución -6 contables resultado total 16.6 x 10 7 u.f.c en el paquete original de Trichoderma harzianum resultado total 16.6 x 10 7 u.f.c en el paquete original de Trichoderma harzianum

37 37 RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 55 g/kg substrato estéril. Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 55 g/Kg substrato no estéril.

38 38 RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 55 g/kg substrato estéril (transplante). Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 27.5 g/kg substrato estéril.

39 39 RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 27.5 g/Kg substrato no estéril. Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 27.5 g/Kg substrato estéril, transplante.

40 40 RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Aspergillus A-5. Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Glomus mosseae.

41 41 RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Glomus intraradices Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Glomus claroideum.

42 42 RESULTADO DEL REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDA En todas las pruebas de aislamiento se dio positivo en cuanto a infestación de las plantas por Fusarium oxysporum f. sp. Melonis. En todas las pruebas de aislamiento se dio positivo en cuanto a infestación de las plantas por Fusarium oxysporum f. sp. Melonis. Reaislamiento del patógeno en PDA de plantas tratadas con Glomus intraradices Reaislamiento del patógeno de planta tratada con Trichoderma harzianum utilizando la dosis recomendada (substrato no estéril)

43 43 REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDA Porcentajes de reaislamiento de Fom en explantes de plantas tratadas con distintas dosis de Trichoderma harzianum, en substrato estéril (SE) y no estéril (SNE), procedentes de explantes de raíz (R), cuello (C), tallo bajo (TB), tallo medio (TM) y tallo alto (TA).

44 44 REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDA Porcentajes de reaislamiento de Fom en explantes de plantas tratadas con Micorrizas Arbusculares, en sustrato estéril (SE), procedentes de explantes de raíz (R), cuello (C), tallo bajo (TB), tallo medio (TM) y tallo alto (TA).

45 45 3.RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A. 3. RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A. Los porcentajes de raíz micorrizada obtenidos son los siguientes: Los porcentajes de raíz micorrizada obtenidos son los siguientes: - Glomus intraradices: 1012 % - Glomus mosseae: 1041 % - Glomus claroideum: 1023 % Resultado del cálculo del porcentaje de micorrización de las raíces de las plántulas de melón tratadas con micorrizas.

46 46 RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A. Observación de la micorriza por el microscopio, donde se aprecian vesículas dentro de la raíz.

47 47 4. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS Comparativa de las diferentes curvas de progreso de la enfermedad de los ensayos realizados Comparativa de las diferentes curvas de progreso de la enfermedad de los ensayos realizados

48 48 DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS En los diferentes ensayos realizados, se ha podido observar que las plántulas de melón tratadas con Trichoderma harzianum (55 gr/kg substrato estéril) y Glomus claroideum, han conseguido retardar el proceso de infección del patógeno Fom raza 1.2 en 8 días, siendo la media de los demás ensayos de 5,8 días. En los diferentes ensayos realizados, se ha podido observar que las plántulas de melón tratadas con Trichoderma harzianum (55 gr/kg substrato estéril) y Glomus claroideum, han conseguido retardar el proceso de infección del patógeno Fom raza 1.2 en 8 días, siendo la media de los demás ensayos de 5,8 días. Se ha comprobado de igual forma que tras el reaislamiento del patógeno en PDA en todos los ensayos realizados, éste se ha desplazado de forma sistémica por toda la plántula produciendo la muerte. Se ha comprobado de igual forma que tras el reaislamiento del patógeno en PDA en todos los ensayos realizados, éste se ha desplazado de forma sistémica por toda la plántula produciendo la muerte.

49 49 5. RESULTADO DEL ANÁLISIS ESTADÍSTICO ANOVA Table: En los ensayos realizados no hubo diferencias significativas entre las variables, con un 95% de nivel de confianza. ANOVA Table: En los ensayos realizados no hubo diferencias significativas entre las variables, con un 95% de nivel de confianza. MULTIPLE RANGE TESTS: En los ensayos realizados no hubo diferencias significativas entre los pares de datos, con un 95% de nivel de confianza. MULTIPLE RANGE TESTS: En los ensayos realizados no hubo diferencias significativas entre los pares de datos, con un 95% de nivel de confianza.

50 50 CONCLUSIONES Los microorganismos que han resultado demostrar su eficacia antagonista ante el patógeno Fusarium oxysporum f. sp. melonis raza 1.2 en el control biológico in vitro tras realizarse los experimentos han sido: Trichoderma harzianum y Aspergillus A- 5. Los microorganismos que han resultado demostrar su eficacia antagonista ante el patógeno Fusarium oxysporum f. sp. melonis raza 1.2 en el control biológico in vitro tras realizarse los experimentos han sido: Trichoderma harzianum y Aspergillus A- 5. En los ensayos realizados, se ha comprobado que la inoculación con Trichoderma harzianum (empleando la dosis de 55 gr/kg como 27.5 gr/kg) estimuló el crecimiento de las plántulas de melón. En los ensayos realizados, se ha comprobado que la inoculación con Trichoderma harzianum (empleando la dosis de 55 gr/kg como 27.5 gr/kg) estimuló el crecimiento de las plántulas de melón.

51 51 CONCLUSIONES Ningún hongo o bacteria que se ha utilizado en este proyecto ha dado como resultado un control total de Fusarium oxysporum f. sp. melonis, si bien se ha demostrado que los hongos Trichoderma harzianum (dosis 55 gr/Kg de substrato estéril) y Glomus claroideum ha retardado la aparición de los síntomas del hongo patógeno sobre las plántulas que se han tratado. Ningún hongo o bacteria que se ha utilizado en este proyecto ha dado como resultado un control total de Fusarium oxysporum f. sp. melonis, si bien se ha demostrado que los hongos Trichoderma harzianum (dosis 55 gr/Kg de substrato estéril) y Glomus claroideum ha retardado la aparición de los síntomas del hongo patógeno sobre las plántulas que se han tratado. Los porcentajes de micorrización de las raíces de las plántulas de melón tratadas con Micorrizas Arbusculares (MA) han sido bajos, alrededor de un 10 %, debido a esto su eficacia como microorganismo antagonista no ha sido efectivo Los porcentajes de micorrización de las raíces de las plántulas de melón tratadas con Micorrizas Arbusculares (MA) han sido bajos, alrededor de un 10 %, debido a esto su eficacia como microorganismo antagonista no ha sido efectivo

52 FINAL PRESENTACIÓN


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