ADRIANA ESPITIA 66508028 KAREN SÁNCHEZ 66508041 LAURA TOCARRUNCHO 66508013.

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1 ADRIANA ESPITIA 66508028 KAREN SÁNCHEZ 66508041 LAURA TOCARRUNCHO 66508013

2  Bacilos y coco bacilos Gram positivos  No esporas  Anaerobio facultativo  Presentan de 1 a 5 flagelos peritricos  Se han encontrado en el suelo, materia vegetal en putrefacción, pollo fresco y congelado, alimentos frescos y procesados, queso, y leche no procesada  Su temperatura optima para el crecimiento es de 30ºC y 37ºC

3 SustratoL. monocitogenes L. bulgarica L. grayi L. murrayi Hemolisisbeta No Reducción NO3 ---+ Voges Proskauer ++++ Xilosa Rhamnosa Manitol -+--+- +--+-- --+--+ --+--+ Pruebas CAMP +--- Motilidad en sombrilla 20-25 ++++ Motilidad en sombrilla 37 ----

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5 MUESTRA CLÍNICA L.C.R,Secreciones genitales, biopsias Endometrio, materia fecal, secreción ocular, tejidos de necropsia y meconio Coloración de Gram : Bacilos y Cocobacilos Gram Positivos Agar Tripticasa Soya Agar infusión Corazón + 5% Sangre Cordero Agar Sangre 35 – 37, 24- 48 h en atmosfera de CO2. Aislamiento de colonias pequeñas, húmedas con Beta- hemolisis. Prueba Catalasa Positiva prueba motilidad a 20-25 por 48-72 h, formación de sombrilla por debajo de la superficie del medio de motilidad.

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8 Bacilo Gram positivo No esporulado Anaerobio facultativo Crece a temperaturas de 1 a 45°C. La mayoría de casos de enfermedad en seres humanos son causados por los serotipos 1/2a, 1/2b y 4b.

9  Capacidad de sobrevivir dentro de las células.  Mucopolisacarido capsular  Hemolisinas  Listeriolisina O

10 SUCEPTIBILIDAD RESISTENCIA Sulfato de colistina Acido nalidixico Polimixina B sulfanamidas s SENSIBILIDAD Ampicilina Carbencilina Cefalorodina Cloronfenicol Eritromicina Furazolidina Neomicina Novobiocina

11 Susceptibilidad recién nacidos personas con sistemas inmunes debilitados personas con cáncer, diabetes o enfermedad renal Las personas con SIDA Los ancianos Mujeres embarazadas.

12 ALIMENTOS Legumbres y hortalizas contaminadas con estiércol utilizado como abono. Carnes y verduras (crudos) Quesos, leche y alimentos derivados sin pasteurizar Carnes frías AMBIENTES Suelo Agua Lodo ANIMALES Domésticos Silvestres infectados Aves de corral

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16 Cefalea Aumento del peso del cerebro Fiebre Escalofríos Convulsiones

17 FETO Muerte intrauterina RECIEN NACIDO Parto prematuro Septicemia Meningitis neonatal

18 Periodo de incubación Desde 3 a 70 días después de una sola exposición a un producto sospechoso. Periodo de transmisibilidad Las madres de los recién nacidos pueden excretar el agente infeccioso con las secreciones vaginales y la orina durante 7 a 10 días tras el parto. Las personas infectadas pueden excretar microorganismos en las heces durante varios meses.

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20 LISTERIOSIS NEONATAL LISTERIOSIS MENINGOEN CEFALICA LISTERIOSIS SEPTICÉMICA

21  Paciente de 29 años de edad, con embarazo de 15 semanas, ingresa al servicio derivada del hospital Melipilla para manejo y estudio de síndrome febril prolongado.  Historia de 15 días de evolución caracterizada por tos seca, expectoración escasa, congestión nasal, cefalea, fiebre, mialgias generalizadas.  Antes de ingresar se indicó PNC sódica 2 millones c/8 hrs ante la sospecha de neumonía.

22 Exámenes de laboratorio: Hto 36%, blancos 10800,leucorrea, ecografía obstétrica muestra gestación única sin elementos sugerentes a patología. Evaluada por medicina interna, pensando en fiebre tifoidea se indica cloramfenicol 1gc/8hrs por 2 semanas. 1er día serología hepatitis y fiebre tifoidea, VIH,(-).Se toman hemocultivos (3 mx). 2do día evaluada por infectología se trataría de neumonía atípica, aunque no se puede descartar 100% fiebre tifoidea.

23  BGP corto delgado, no esporulado  Anaerobio facultativo  Catalasa positiva  Cto agar sangre (hemólisis B, colonias pequeñas)  24-48 hrs de incubación ats CO2  Crece en forma de sombrilla abierta(20-25ºc)  Presenta motilidad  Puede ser aislado de sangre, LCR Y líquido amniótico.  Reducción de nitritos-  Voges proskauer+  Prueba de CAMP+

24 A Gly 145 Ser Substitution in the transcriptional activator PrFA Causes Constitutive Overexpression of Virulence Factors in Listeria Monocytogenes Una sustitución de Glicina por Serina en la región 145 en el activador transcripcional PrFA constituye la sobrexpresion de los factores de virulencia en Listeria Monocytogenes

25 Gen PrFACoordina los factores de virulencia Miembro del AMP cíclico y del CRP P 14 A es un mutante espontáneo de listeria monocytogenes que produce niveles elevados de factores de virulencia; este posee una mutación en el codón 145 del PrFA dando lugar a una sustitución de glicina por serina

26 Listeria Monocytogenes es una patógeno intracelular anaerobio facultativo y agente causal de la Listeriosis. Hly: Conjunto de Genes que codifican los factores de virulencia de Listeria M. Transcribe y codifica la Listeriolisina O hly Lectinasa MPL, ActA PlcB PlcA

27 Cepas de tipo Silvestre: Crecimiento a 37 C en BHI; Factores de virulencia leves TIPO 1 TEMPERATURA : Factores de virulencia TIPO 2 En conclusion una simple sustitucion de un aa en PrFA causa la sobrexpresion de los factores de virulencia. PrFA y CRP puenden cambiar de inactivo a activo debido a factores ambientales.

28 MATERIALES Y METODOS  Cepas Bacterianas: Listeria M, E coli.  Plásmidos : Tabla 1  Cultivos BHI  Antibioticos apropiados.

29 Métodos de ADN: PCR (reaccion en cadena de la polimerasa) Se utilizo para amplificar en ADN en segmentos específicos. Plásmido de ADN fue extraído de la E.coli y de la Listeria M. ( bromuro de cetilmetilamonio) RESULTADOS Y DISCUSION El PrFA se activa a temperaturas de 30 C y se inactiva en 20 C por lo tanto para estudiar la hemolisina es mejor en temperaturas entre 20 y 37 C LO28 es un a cepa de laboratorio utilizada en trabajos de investigación Tanto P14 y LO28 dieron diferentes patrones: P14 : los niveles de ARNm para PrFA y hly se aumentaron LO28 : Se observaron niveles significativos de transcripción (PclB, hly)

30  El fenotipo de P14 A se debe a un alteración en PrFA que aumenta su actividad  PCR  P14 y P14 A las hebras son similares la única diferencia es que P14 A tiene una modificación en el triplete 145.  En conclusión los investigadores pretendían conocer cual cepa era que tenia la mutación.

31 LA SUSTITUCION DE GLY 145 SER EN PrFA ES LA CAUSA DE LA SOBREEXPRESION DE LOS FACTORES DE VIRULENCIA EN L.M. Para determinar si la sustitución glicina por serina en la región 145 del gen PrFA afecta la virulencia de Listeria M, se inserto una cepa silvestre y alelos mutantes de PrFA en la cepas P14 y P14 A además se introdujeron E.coli, Bacillus y Listeria. Aparecieron nuevos transposones mutantes.

32 COMPARACION ENTRE 2 HELICES DE ADN UTILES PARA LA COMPROBACION DE LA MUTACION

33 MODELO PARA PrFA MEDIADA POR LA REGULACION DE LOS GENES DE VIRULENCIA DE LISTERIA M.

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